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聽雪看山木蟲 (職業(yè)作家)
西游家族之T所長
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[交流]
【求助/交流】單酶切載體竟然沒切開，尋求原因？？ 已有5人參與
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我用的載體是5500bp，酶是XmaI，去過磷酸化的。這個(gè)酶切已經(jīng)做過n多次了，插入基因就是沒辦法和載體連接上，自連現(xiàn)象嚴(yán)重。當(dāng)時(shí)以為是去磷酸化步驟的問題，然后就做過2次去磷酸化。 后來在做完酶切后做了一個(gè)轉(zhuǎn)化，將50ng酶切液用電子穿孔儀轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞，隔夜培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)n多菌斑，那就是意味著沒有酶切成功，心里這個(gè)郁悶��！ 我用的這個(gè)酶據(jù)說是比較難反應(yīng)的，所以當(dāng)時(shí)酶切都是隔夜至少10個(gè)小時(shí)以上了��！ 我現(xiàn)在真的是一點(diǎn)辦法也沒有了，本來就是新手，第一次做，竟然還碰到這么大的問題，3個(gè)月了，一點(diǎn)進(jìn)展都沒有，著急�。� 懇請(qǐng)高手們給點(diǎn)建議，小蝦米在這多謝了��！ |
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聽雪看山
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10樓2010-02-11 16:34:00
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