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wangchaokai銀蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】怎樣分離乳酸菌 已有1人參與
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| 本人由于工作的需要，要從泡菜或酸奶中分離乳酸菌，哪位蟲友做過的給指點(diǎn)一下哈，最好有培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)方法和乳酸菌菌落的鑒別，謝謝！如有資料可以發(fā)下面郵箱：gswangchaokai@126.com |
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dhd997
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- 專業(yè): 生物化工與食品化工
- 管轄: 分子生物
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
scelab(金幣+2):辛苦~~~ 2010-05-23 21:19:29
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scelab(金幣+2):辛苦~~~ 2010-05-23 21:19:29
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資料來(lái)源 http://zhidao.baidu.com/question/5984447.html 我也在做這個(gè)，下面是我整理的，時(shí)間關(guān)系只能這樣了，可以看看。都要求無(wú)菌操作 菌種的分離 取lmL鹵汁以10倍遞增稀釋方法（一份泡菜汁，九份無(wú)菌水，再取一份第一只管中溶液，加九份無(wú)菌水，依次類推），將其稀釋至1/10～10的-10次冪（我打不上去），然后從不同濃度稀 釋液中分別取lmL傾注在平皿中，再倒入培養(yǎng)基相混合，待培養(yǎng)基凝固后倒置于30~C恒溫下 培養(yǎng)48h。挑取長(zhǎng)勢(shì)良好的單個(gè)茵落劃線分純，直至純化(茵落單個(gè)大小一致，革蘭氏染色鏡 檢，茵體一致)。結(jié)果分離得到3株不同菌株，分別編號(hào)為菌株1、菌株2、菌株3。再分別轉(zhuǎn)移 到試管斜面上進(jìn)行保存。 分離用培養(yǎng)基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，蒸餾水1 000 mL，瓊脂20g，pH7．0—7．2 ；保存用斜面培養(yǎng)基：酵母膏1％ ，碳酸鈣2％ ，葡萄糖1％ ，瓊脂2％ ，pH 7．0。 培養(yǎng)條件 將分離出的菌株1、菌株2、菌株3分別接種在上述4種不同的培養(yǎng)基上， 在30�！�=恒溫條件下培養(yǎng)48h后觀察并測(cè)定其培養(yǎng)結(jié)果。 測(cè)定方法 菌落總數(shù)采用逐級(jí)稀釋法來(lái)計(jì)數(shù)；pH值用pHS一2C酸度計(jì)測(cè)定；乳酸定性 及含量測(cè)定依據(jù)食品檢驗(yàn)技術(shù) 1I．2．1乳酸菌的分離與篩選的試驗(yàn)程序 自然發(fā)酵酸菜汁液一稀釋一培養(yǎng)一挑起單菌落染色、鏡檢一挑 選革蘭氏陽(yáng)性球菌單菌落一Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基一挑選溶鈣圈大的球菌反復(fù)在Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基上幾次純化篩選一單菌落優(yōu) 良菌株一試管穿刺低溫保存。 1．2 1．2 乳酸菌的鑒定 用光學(xué)顯微鏡、放大鏡進(jìn)行乳酸菌的形態(tài)特征鑒定。生理生化特征鑒定：產(chǎn)乳 酸定性試驗(yàn)——乳酸紙層析法0- 、過氧化氫酶(接觸酶)反應(yīng)⋯、明膠水解反應(yīng) 、硫化氫反應(yīng) 、乳酸菌 發(fā)酵營(yíng)養(yǎng)型試驗(yàn)0 、耐鹽、酸、溫度試驗(yàn)。 1．2．I．3 乳酸菌的保存⋯ 采用定期移植低溫保藏法。培養(yǎng)基配方：葡萄糖1％ 、蛋白胨0 2％ 、 l(}l2PQ|0．2％、瓊脂20％、pH值7 0，分裝試管，121。c滅菌30min。將使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后期的細(xì)胞進(jìn)行穿刺 培養(yǎng)，然后密封存于冰箱玲藏室內(nèi)(5qc左右)，2個(gè)月移植1次。 1．2．2 分離乳酸菌的生理特點(diǎn)試驗(yàn) 1 2 2．1 最適生長(zhǎng)溫度的測(cè)定OD值以同溫下不接種培養(yǎng)基作對(duì)照，定期取出接種培養(yǎng)基在721分光光度 計(jì)上，用最大吸收光波長(zhǎng) =6001RIifl測(cè)定。 1．2．2．2 生長(zhǎng)周期的測(cè)定oD值(方法同上)；pH值：PHB一4pH計(jì)；可滴定酸(以乳酸計(jì))：吸取ImL菌液 加入9Ⅱ1L蒸餾水，加入1～2滴酚酞，用0．1NNaOH滴定。 1．2 2．3 最適pH值的測(cè)試、最適鹽濃度的測(cè)試。 供試樣品及培養(yǎng)基 分離用樣品：泡菜汁、酸奶及西紅柿均為市售 分離用培養(yǎng)基：①BCP培養(yǎng)基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0 04g，瓊脂15g， 蒸槽水lO00ml，pH7 0；②MRS培養(yǎng)基見文獻(xiàn) 。 菌種保藏用培養(yǎng)基：脫脂乳培養(yǎng)基：新鮮牛乳離心去掉上層乳脂，下層奶液分裝試管，105℃ 滅菌20mln。 菌利 鑒定用培養(yǎng)基見文獻(xiàn) 6。 1 2 方法 1 2 1 乳酸菌的分離純化 取泡菜汁、酸奶、西紅柿表面洗液進(jìn)行梯度稀釋，分別用傾注法、涂布 法和劃線法在BCP和MRS培養(yǎng)基平板上進(jìn)行菌種分離。挑取在BCP平板上有透明目的菌落，在 MRS平扳上有溶鈣圈的菌落，反復(fù)純化至純種，挑菌至脫脂牛奶試管中保存 1．2 2 乳酸菌復(fù)篩對(duì)初篩菌株進(jìn)行革蘭氏染色，保留革蘭氏陽(yáng)性菌株．并對(duì)其所產(chǎn)乳酸能力進(jìn) 行定性、定量分析，篩選出產(chǎn)酸高的菌株保存，再把產(chǎn)酸高的菌株經(jīng)蘿l、汁發(fā)酵 】，進(jìn)一步選擇產(chǎn) 酸高、_l】味純正的菌株保存鑒定 1 2 3 乳酸定性測(cè)定果用紙層析法。溶劑系統(tǒng)為乙醇：濃氨水：水=80：5：15，顯色劑為0 04％ 的溴甲酚紫酒精溶液。層析時(shí)將乳酸、檸檬酸配成1％ 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，兩種標(biāo)準(zhǔn)溶液 及乳酸發(fā)酵液 均點(diǎn)樣3 ．上行層析，顯色與標(biāo)準(zhǔn)樣比較 1．2 4 乳酸的定量測(cè)定采用氣相色譜法，利用芐酯化法制備乳酸衍生物，將待測(cè)乳酸菌株在產(chǎn) 酸培養(yǎng)基內(nèi)37"C培養(yǎng)3d，離心。取上清液剃備衍生物，氣相色譜分析含量。氣相色譜工作條件為： EGS色譜柱，柱溫160'C，氣化溫度180'17．，檢測(cè)器溫度l70"C，載氣為N，。 1．2 5 菌種鑒定根據(jù)《簡(jiǎn)明第八版伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》 和《一般細(xì)菌常用鑒定手冊(cè)》[6 對(duì)復(fù)篩 出的菌株的形態(tài)、生理生化、碳源利用等方面進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，并提取乳酸菌株DNA，采用熔鏈溫度 法捌G+C％含量 J。 |
2樓2010-05-23 20:57:41
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