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86397520新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助】關(guān)于HPLC的色譜分析和光譜分析的問(wèn)題，請(qǐng)老師們賜教！ 已有2人參與
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今天遇到一個(gè)比較麻煩的HPLC分離問(wèn)題，我的產(chǎn)物（有羧基，喹啉酮基團(tuán)，苯丙氨酸基團(tuán)），利用參考文獻(xiàn)說(shuō)是328nm（21.4 X 250 mm C18 反相柱(Dynamax 60 A ）作為激發(fā)波長(zhǎng)，我使用了（Zorbax SB-C18，9.4X150， 80A; ）328nm和210nm，230nm，其參考吸收波長(zhǎng)是600nm。但色譜結(jié)果表明，210和230nm的峰在10min內(nèi)全部同時(shí)出來(lái)，而328nm這個(gè)激發(fā)根本沒(méi)有峰，請(qǐng)問(wèn)為什么？采取328nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)的理由是： 1，參考文獻(xiàn)是那個(gè)波長(zhǎng)， 2，我自己利用分光光度計(jì)掃波譜的結(jié)論：我這里沒(méi)有Uv分光光度計(jì)，只有熒光分光光度計(jì)。我將產(chǎn)物，用328nm激發(fā)，在PE公司的LS-55熒光分光光度計(jì)掃描波普，發(fā)現(xiàn)328nm激發(fā)確實(shí)有熒光350-500nm，最大發(fā)射峰位置410nm。反過(guò)來(lái)，使用該儀器在410nm發(fā)射峰掃描出的激發(fā)波譜在310-400nm為激發(fā)波譜，最大激發(fā)峰在375nm。我認(rèn)為，既然在310-400nm是激發(fā)譜，肯定在328nm有吸收。 請(qǐng)問(wèn)我以上的做法是否正確？什么波長(zhǎng)為我檢測(cè)的最佳波長(zhǎng)？多謝！ [ Last edited by 86397520 on 2010-5-28 at 11:12 ] |
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