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[交流] 【求助】肉桂酸-4-羥化酶測(cè)定方法已有6人參與

請(qǐng)各位高人傳授肉桂酸-4-羥化酶（C4H）的光度測(cè)定方法，謝謝

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1樓 2010-06-12 21:16:05

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fu108042

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參照Lamb 和Rubery等的方法。準(zhǔn)確稱取鮮樣0.2g,冰浴研磨后加入3ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl:pH8.9,15mmol/Lβ-巰基乙醇，4 mmol/L MgCl2,5mmol/L Vc,10μmol/L Leupeptin,1 mmol/L PMSF,0.15%:m/V PVP,10%甘油，混勻后超聲波破碎2 min,四層紗布過(guò)濾后，在4℃下以12000r./min 離心20min .取上清液為C4H粗酶提取液。酶反應(yīng)液組成為：0.8ml 酶提取液，2.2ml緩沖液（2μmol/L 反式肉桂酸，50 mmol/L Tris-HCl: pH8.9, 2μmol/L NADPNa2,5μmol/L G6-PNa2）.25℃下振蕩30分鐘后，加入100μL 6mol/L HCl終止反應(yīng)，以12000r./min 離心10min，取上清液在340 nm處比色。參比為不加酶提取液（加入0.8 mL ddH2O）.酶活性表示為：U/(mg.h)

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2樓2011-02-28 13:19:56

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煙盡花落

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計(jì)算公式呢~
求詳細(xì)的測(cè)定方法~
拜托了~
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3樓2011-10-11 23:30:34

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酶活以每小時(shí)內(nèi)OD340變化0.01為1個(gè)活性單位，酶活性表示為：U/h/mg protein。它的酶活性測(cè)定為動(dòng)力學(xué)測(cè)定方法，用一段時(shí)間的吸光度值得差值除以時(shí)間和樣品中蛋白含量的乘積

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4樓2011-10-20 14:45:22

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pd1987

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5樓2012-02-15 23:12:47

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王曼瑩

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2樓: Originally posted by fu108042 at 2011-02-28 13:19:56
參照Lamb 和Rubery等的方法。準(zhǔn)確稱取鮮樣0.2g,冰浴研磨后加入3ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl:pH8.9,15mmol/Lβ-巰基乙醇，4 mmol/L MgCl2,5mmol/L Vc,10μmol/L Leupeptin,1 mmol/L PMSF,0.15%:m/V PVP,10%甘油，混 ...

請(qǐng)問(wèn)G6-PNa2是什么呀？

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6樓2013-11-12 22:16:58

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3樓: Originally posted by 煙盡花落 at 2011-10-11 23:30:34
計(jì)算公式呢~
求詳細(xì)的測(cè)定方法~
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7樓2013-11-12 22:18:25

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藍(lán)苑1988

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7樓: Originally posted by 王曼瑩 at 2013-11-12 22:18:25
請(qǐng)問(wèn)G6-PNa2是什么呀？...

D-葡萄糖-6-磷酸二鈉鹽

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石頭

8樓2013-12-18 10:13:42

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王曼瑩

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8樓: Originally posted by 藍(lán)苑1988 at 2013-12-18 10:13:42
D-葡萄糖-6-磷酸二鈉鹽...

9樓2013-12-20 17:00:35

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LIVESOCCER

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4樓: Originally posted by 求學(xué)無(wú)止境 at 2011-10-20 14:45:22
酶活以每小時(shí)內(nèi)OD340變化0.01為1個(gè)活性單位，酶活性表示為：U/h/mg protein。它的酶活性測(cè)定為動(dòng)力學(xué)測(cè)定方法，用一段時(shí)間的吸光度值得差值除以時(shí)間和樣品中蛋白含量的乘積

你好！文獻(xiàn)上沒(méi)說(shuō)結(jié)算一段時(shí)間內(nèi)的差值啊

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10樓2014-03-07 15:13:00

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