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求學(xué)無(wú)止境木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助】肉桂酸-4-羥化酶測(cè)定方法 已有6人參與
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| 請(qǐng)各位高人傳授肉桂酸-4-羥化酶（C4H）的光度測(cè)定方法，謝謝 |
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王曼瑩
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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6樓2013-11-12 22:16:58
fu108042
木蟲(chóng) (初入文壇)
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
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| 參照Lamb 和Rubery等的方法。準(zhǔn)確稱(chēng)取鮮樣0.2g,冰浴研磨后加入3ml提取液（50 mmol/L Tris-HCl:pH8.9,15mmol/Lβ-巰基乙醇，4 mmol/L MgCl2,5mmol/L Vc,10μmol/L Leupeptin,1 mmol/L PMSF,0.15%:m/V PVP,10%甘油，混勻后超聲波破碎2 min,四層紗布過(guò)濾后，在4℃下以12000r./min 離心20min .取上清液為C4H粗酶提取液。酶反應(yīng)液組成為：0.8ml 酶提取液，2.2ml緩沖液（2μmol/L 反式肉桂酸，50 mmol/L Tris-HCl: pH8.9, 2μmol/L NADPNa2,5μmol/L G6-PNa2）.25℃下振蕩30分鐘后，加入100μL 6mol/L HCl終止反應(yīng)，以12000r./min 離心10min，取上清液在340 nm處比色。參比為不加酶提取液（加入0.8 mL ddH2O）.酶活性表示為：U/(mg.h) |
2樓2011-02-28 13:19:56
煙盡花落
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3樓2011-10-11 23:30:34
求學(xué)無(wú)止境
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2011-10-20 14:45:22
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