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lfgc8505金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】PFU擴不出東西來，請各路大俠幫幫小蟲啊~~~~~~~ 已有11人參與
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最近在做PCR，因為要擴的片段比較長，1800BP.用專擴長片段的LA酶擴了，效果可以，但是測序發(fā)現(xiàn)有突變，因為我要求不能有突變，所以沒用。改用promega的PFU后，怎么都擴不出東西來，退火溫度都試了（50-65），之前用的是57度都能擴出來。 我的反應程序，是95 3分鐘 95 30秒 50/65 30秒 72 4分鐘 30個循環(huán) 72 10分鐘 反應體系使用的是說明書上的推薦體系。 但是就是沒有我的目的條帶，只有兩條約800和300的雜帶！ 崩潰了，這馬上又要回報了，還是做出來啊~請各路蟲友幫幫忙啊。發(fā)表一下你們的高建啊！ 小蟲不勝感激！ |
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