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lfgc8505金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】PFU擴(kuò)不出東西來(lái)，請(qǐng)各路大俠幫幫小蟲啊~~~~~~~ 已有11人參與
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最近在做PCR，因?yàn)橐獢U(kuò)的片段比較長(zhǎng)，1800BP.用專擴(kuò)長(zhǎng)片段的LA酶擴(kuò)了，效果可以，但是測(cè)序發(fā)現(xiàn)有突變，因?yàn)槲乙蟛荒苡型蛔儯詻](méi)用。改用promega的PFU后，怎么都擴(kuò)不出東西來(lái)，退火溫度都試了（50-65），之前用的是57度都能擴(kuò)出來(lái)。 我的反應(yīng)程序，是95 3分鐘 95 30秒 50/65 30秒 72 4分鐘 30個(gè)循環(huán) 72 10分鐘 反應(yīng)體系使用的是說(shuō)明書上的推薦體系。 但是就是沒(méi)有我的目的條帶，只有兩條約800和300的雜帶！ 崩潰了，這馬上又要回報(bào)了，還是做出來(lái)啊~請(qǐng)各路蟲友幫幫忙啊。發(fā)表一下你們的高建�。� 小蟲不勝感激！ |
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zsxnd
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