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jiangkuo0520金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】原核表達(dá) 蛋白沒(méi)有表達(dá)求助！ 已有12人參與
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構(gòu)建了3個(gè)融合基因片段，倒入PQE30載體，測(cè)序正確后，誘導(dǎo)表達(dá)只有1個(gè)蛋白表達(dá)了，條件都是一樣的 轉(zhuǎn)化，搖菌12H，菌液PCR驗(yàn)證正確，轉(zhuǎn)接， 37℃2.5H ，1:50轉(zhuǎn)接 37℃，1MMOL/L IPTG 1：1000 誘導(dǎo)3H，超聲裂菌，SDS-PAGE結(jié)果其中的一個(gè)表達(dá)了，2個(gè)沒(méi)有表達(dá)，求助，謝謝！ 有位蟲(chóng)友告訴我 讓我重新連接，轉(zhuǎn)化，可是我測(cè)序是正確的啊！ 不知道是什么原因? [ Last edited by jiangkuo0520 on 2010-6-29 at 21:42 ] |
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liyong1981 
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5樓2010-06-28 09:37:26
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4樓2010-06-28 09:32:50
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6樓2010-06-28 09:38:27
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7樓2010-06-28 10:16:17
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8樓2010-06-28 10:35:59
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dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-06-28 10:42:10
jiangkuo0520(金幣+1):據(jù)師姐經(jīng)驗(yàn)此蛋白應(yīng)該以包涵體表達(dá) 2010-06-28 12:00:01
dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-06-28 10:42:10
jiangkuo0520(金幣+1):據(jù)師姐經(jīng)驗(yàn)此蛋白應(yīng)該以包涵體表達(dá) 2010-06-28 12:00:01
| 看你表達(dá)的蛋白是何種類型蛋白，一般情況下水溶蛋白好表達(dá)，如谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶，若是真核生物膜蛋白、或是蛋白中有信號(hào)臺(tái)等則不宜表達(dá)，還有有時(shí)表達(dá)的量太低，sds-page檢測(cè)不到，只能werstern雜交才能檢測(cè)。所以先要好好分析一下基因的種類特點(diǎn)。 |
9樓2010-06-28 10:40:20
liyong1981
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10樓2010-06-28 10:42:03
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