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cgt713銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】離子交換純化原核表達(dá)蛋白 已有6人參與
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| 目的蛋白的等電點(diǎn)是6.0左右，目的蛋白無(wú)純化標(biāo)簽，我選擇GE的CM-Sepharose F.F.進(jìn)行純化，pH5.1醋酸緩沖液平衡柱子和上樣，然后用pH5.1醋酸緩沖液（內(nèi)含0-0.5mol/L的NaCl）進(jìn)行梯度洗脫，通過(guò)測(cè)定蛋白濃度，跑SDS-PAGE發(fā)現(xiàn)我的蛋白回收率特別低，然后我一直不知道我的蛋白跑哪里去了，后來(lái)我過(guò)完柱子后取一點(diǎn)柱子里的填料來(lái)煮樣跑SDS-PAGE，發(fā)現(xiàn)原來(lái)還有很多蛋白(包括目的蛋白和雜蛋白）掛在柱子上，沒(méi)有下來(lái)。我就加大了NaCl的濃度來(lái)洗脫，蛋白還是有很多下不來(lái)，請(qǐng)大家?guī)臀曳治鱿略蚝吞峁c(diǎn)解決途徑 謝謝。 |
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