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zboter銀蟲(chóng) (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】做淀粉酶的請(qǐng)進(jìn) 有獎(jiǎng) 已有2人參與
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我是剛做淀粉酶的，克隆表達(dá)了一段淀粉酶基因后，SDS-PAGE發(fā)現(xiàn)有目的蛋白表達(dá)，但是在測(cè)酶活的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，當(dāng)我把細(xì)胞破碎液加緊底物后，蛋白就會(huì)和淀粉共沉淀，請(qǐng)問(wèn)這是怎么回事，如何解決?（胞內(nèi)酶） 酶活測(cè)定方法：取10 mL 1%的馬鈴薯淀粉溶液(pH 4.0)放入一支試管內(nèi)，于40 ℃預(yù)熱10 min后，加入1 mL的發(fā)酵酶液，搖勻，精確保溫10 min。用移液管吸取1 mL反應(yīng)液置于盛有10 mL、0.1 mol/L HCl的試管中，再取0.5 mL混合液體于盛有10 mL碘液的試管中，搖勻，并立即用分光光度計(jì)于660 nm處測(cè)定吸光度。用同樣方法測(cè)定空白值，但不加發(fā)酵液，而帶之以1.0 mL的蒸餾水。以蒸餾水作為參比液。 酶活定義：1個(gè)酸性α-淀粉酶單位相當(dāng)于在pH 4.0，溫度40 ℃，1 min將濃度為1%的馬鈴薯淀粉溶液的顯藍(lán)強(qiáng)度降低1%時(shí)所需酶量。 |
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