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zboter銀蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】做淀粉酶的請進 有獎 已有2人參與
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我是剛做淀粉酶的，克隆表達了一段淀粉酶基因后，SDS-PAGE發(fā)現(xiàn)有目的蛋白表達，但是在測酶活的時候發(fā)現(xiàn)，當(dāng)我把細胞破碎液加緊底物后，蛋白就會和淀粉共沉淀，請問這是怎么回事，如何解決?（胞內(nèi)酶） 酶活測定方法：取10 mL 1%的馬鈴薯淀粉溶液(pH 4.0)放入一支試管內(nèi)，于40 ℃預(yù)熱10 min后，加入1 mL的發(fā)酵酶液，搖勻，精確保溫10 min。用移液管吸取1 mL反應(yīng)液置于盛有10 mL、0.1 mol/L HCl的試管中，再取0.5 mL混合液體于盛有10 mL碘液的試管中，搖勻，并立即用分光光度計于660 nm處測定吸光度。用同樣方法測定空白值，但不加發(fā)酵液，而帶之以1.0 mL的蒸餾水。以蒸餾水作為參比液。 酶活定義：1個酸性α-淀粉酶單位相當(dāng)于在pH 4.0，溫度40 ℃，1 min將濃度為1%的馬鈴薯淀粉溶液的顯藍強度降低1%時所需酶量。 |
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冼亮淀粉酶
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3樓2010-07-02 13:56:31
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6樓2010-07-03 21:10:44
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