 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 藥學 » 其它 » 【分享】HPLC的詳細演講稿
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2479 | 回復: 3 | |||
qijing2010金蟲 (正式寫手)
|
[交流]
【分享】HPLC的詳細演講稿 已有3人參與
|
|
第十三章 高效液相色譜法 第一節(jié) 概述 高效液相色譜法：以氣相色譜為基礎，在經典液相 色譜實驗和技術基礎上建立的一種液相色譜法 一、HPLC與經典LC區(qū)別 主要區(qū)別：固定相差別，輸液設備和檢測手段 1．經典LC：僅做為一種分離手段 柱內徑1~3cm，固定相粒徑>100μm 且不均勻 常壓輸送流動相 柱效低（H↑，n↓） 分析周期長 無法在線檢測 2．HPLC：分離和分析 柱內徑2~6mm，固定相粒徑<10μm（球形，勻漿裝柱） 高壓輸送流動相 柱效高（H↓，n↑） 分析時間大大縮短 可以在線檢測 二、HPLC與GC差別 相同：兼具分離和分析功能，均可以在線檢測 主要差別：分析對象的差別和流動相的差別 1．分析對象 GC：能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品， 高沸點、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及 高聚物的樣品不可檢測 占有機物的20% HPLC：溶解后能制成溶液的樣品， 不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制 分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子 和離子型樣品均可檢測 用途廣泛，占有機物的80% 續(xù)前 2．流動相差別 GC：流動相為惰性氣體 組分與流動相無親合作用力，只與固定相作用 HPLC：流動相為液體 流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、 改善分離度增加了因素，對分離起很大作用 流動相種類較多，選擇余地廣 流動相極性和pH值的選擇也對分離起到重要作用 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相 可以增大分離選擇性 3．操作條件差別 GC：加溫操作 HPLC：室溫；高壓（液體粘度大，峰展寬�。� 三、高效液相色譜儀流程圖 續(xù)前 四、HPLC的特點和應用 “三高” “一快” “一廣” 第二節(jié) 基本理論和條件選擇 一、塔板理論 二、速率理論 三、HPLC法中分離條件的選擇 一、塔板理論 二、速率理論（與GC對比） 續(xù)前 討論： 1）流動相流速對HPLC板高的影響（與GC對比）next 2）渦流擴散項及其影響 next 圖示 back 續(xù)前 3）傳質阻抗項及其影響 圖示 三、HPLC法中分離條件的選擇 1. 固定相與裝柱方法的選擇： 選粒徑小的、分布均勻的球形固定相（dp≤10μm） 首選化學鍵合相，勻漿法裝柱 2. 流動相及其流速的選擇： 選粘度小、低流速的流動相——甲醇，1ml/min 3. 柱溫的選擇： 選室溫250C左右 第三節(jié) 各類高效液相色譜法 一、液固吸附色譜法（LSC） 二、液液分配色譜法（LLC） 三、化學鍵合相色譜法（BPC） 一、液固吸附色譜法（LSC） 流動相為液體，固定相為固體吸附劑 1．分離機制：利用溶質分子占據固定相表面吸附活性 中心能力的差異 分離前提：K不等或k不等 續(xù)前 2．固定相：與LC比，固定相粒徑不同（<10μm） 續(xù)前 3．流動相：底劑（烷烴）+ 有機極性調節(jié)劑 例： 正己烷或庚烷 + 氯仿- - - 4．影響k的因素：與固定相性質和流動相性質有關 溶質分子極性↑，洗脫能力↓，k↑，tR↑ 溶劑系統(tǒng)極性↑，洗脫能力↑，k↓， tR↓ 注：調節(jié)溶劑極性，可以控制組分的保留時間 5．出柱順序：強極性組分后出柱，弱極性組分先出柱 6．硅膠吸水量↑，LSC→LLC 硅膠含水量較小 吸附色譜 硅膠極性較大 硅膠含水量>17% 分配色譜 硅膠失活→載體 吸附的水→固定液 二、液液分配色譜法（LLC） 1．分離機制：利用組分在兩相中溶解度的差異 2．固定相：載體+固定液（物理或機械涂漬法） 缺點：系統(tǒng)內部壓力大，易流失，不實用 固定液——極性→NLLC 固定液——非極性→RLLC 3．正相色譜——固定液極性 > 流動相極性（NLLC） 極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱 適于分離極性組分 反相色譜——固定液極性 < 流動相極性（RLLC） 極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱 適于分離非極性組分 三、化學鍵合相色譜法（BPC） （一）化學鍵合相 （二）反相鍵合相色譜 （三）正相鍵合相色譜 （四）離子對色譜和離子抑制色譜 （一）化學鍵合相 利用化學反應將固定液的官能團鍵合在載體表面 1．分離機制：分配 + 吸附（以LLC為基礎） 2．特點： 1）不易流失 2）熱穩(wěn)定性好 3）化學性能好 4）載樣量大 5）適于梯度洗脫 （二）反相鍵合相色譜 1．分離機制：疏溶劑理論 正相——流動相與溶質排斥力強，作用時間↑ k↑，組分tR↑ 反相——流動相與溶質排斥力弱，作用時間↓， k↓，組分tR↓ 2．固定相：極性小的烷基鍵合相 C8柱，C18柱（ODS柱——HPLC約80%問題） 3．流動相：極性大的甲醇-水或乙腈-水 流動相極性 > 固定相極性 底劑 + 有機調節(jié)劑（極性調節(jié)劑） 例：水 + 甲醇，乙腈，THF 續(xù)前 4．流動相極性與k的關系： 流動相極性↑，洗脫能力↓，k↑，組分tR↑ 5．出柱順序：極性大的組分先出柱 極性小的組分后出柱 6．適用：非極性~中等極性組分（HPLC80%問題） （三）正相鍵合相色譜 1．分離機制：溶質分子與固定相之間定向作用力、 誘導力、或氫鍵作用力 2．固定相：極性大的氰基或氨基鍵合相 3．流動相：極性�。ㄍ琇SC） 底劑 + 有機極性調節(jié)劑 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇 續(xù)前 4．流動相極性與k的關系： 流動相極性↑，洗脫能力↑，組分tR↓，k↓ 5．出柱順序：結構相近組分，極性小的組分先出柱 極性大的組分后出柱 6．適用： 氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍小） 分離物質也相似 氨基鍵合相與硅膠性質差別大，堿性 分析極性大物質、糖類等 （四）離子對色譜和離子抑制色譜 1．反相離子對色譜法 2．反相離子抑制色譜 1．反相離子對色譜法（IPC或PIC） 反相色譜中，在極性流動相中加入離子對試劑，使被測組分 與其中的反離子形成中性離子對，增加k和tR，以改善分離 1）離子對試劑：烷基磺酸鈉→分析堿 四丁基季胺鹽→分析酸 2）影響k的因素 a．與m的極性有關（同反相色譜） b．與R的鏈長有關：R↑長，極性↓小，tR↑，k↑ 3）適用：較強的有機酸、堿 2．反相離子抑制色譜 在反相色譜中，通過加入緩沖溶液調節(jié)流動相pH值，抑制 組分解離，增加其k和tR，以達到改善分離的目的 1）離子抑制劑：弱酸、弱堿性物質 pH一定的緩沖溶液 2）k的影響因素：與流動相極性有關，還與pH值有關 選擇流動相：應同時考慮極性及pH值 酸性物質——加入酸HAc tR↑，k↑ 堿性物質——加入堿NH3·H2O tR↑，k↑ 調節(jié)pH范圍：3.0~8.0 pH>8.0 破壞鍵合相與載體的結合 pH<3.0 腐蝕柱子 3）適用：極弱酸堿物質 pH=3~7弱酸；pH=7~8弱堿；兩性化合物 第四節(jié) 影響分離的因素 1． 續(xù)前 2．對流動相的要求： 1）與固定液不反應 2）對樣品有良好溶解度 k=1~10 k=2~5 最理想的 3）與檢測器匹配： UV（常用，測定波長應大于溶劑的截止波長） 熒光，電化學 4）使用粘度小、純度高的流動相（甲醇，乙腈） 使用前過濾、脫氣 續(xù)前 3．洗脫方式 1）等度洗脫（恒組成溶劑洗脫） 以固定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫組分（一個泵） 類似GC的等溫度洗脫 2）梯度洗脫： 在一定分析周期內不斷變換流動相的種類和比例 即不斷改變其極性（兩個泵） 適于分析極性差別較大的復雜組分 類似GC的程序升溫（沸程較長樣品） 圖示 第五節(jié) 高效液相色譜儀 1．泵： 恒壓泵：流量精度不穩(wěn) 恒流泵：常用 2．進樣裝置 1）隔膜進樣（高分子有機硅膠墊→進樣室） GC系統(tǒng)壓力較小，可以 HPLC系統(tǒng)壓力太大，必須停泵進樣（早期） 2）閥進樣：不必停泵，六通閥 續(xù)前 3．色譜柱：直徑4~6mm,柱長10~30cm 柱效評價：色譜系統(tǒng)適應性試驗 R，n，fs（拖尾因子） 柱再生：維護、保養(yǎng)、柱子的沖洗 4．檢測器 1）紫外檢測器：適于吸收紫外光的物質 2）熒光檢測器：只能分析自身發(fā)光的物質 靈敏度高 3）示差折光檢測器：利用折光率的差別 靈敏度低，溫度要求嚴格 4）電化學檢測器 5）化學發(fā)光 |
回復此樓» 猜你喜歡
085600材料與化工調劑
已經有10人回復
-
279分求調劑 一志愿211
已經有18人回復
-
0703化學求調劑
已經有5人回復
-
材料292調劑
已經有3人回復
-
一志愿陜師大生物學071000，298分，求調劑
已經有3人回復
-
306求0703調劑一志愿華中師范
已經有7人回復
-
333求調劑
已經有3人回復
-
335求調劑
已經有4人回復
-
336求調劑
已經有4人回復
-
303求調劑
已經有4人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 【求助】 HPLC流速跟峰高及峰面積的關系~~~
已經有10人回復
- HPLC柱壓逐漸變小。
已經有27人回復
- 液相HPLC的壓力問題
已經有22人回復
- 急求幫助！hplc溶劑峰問題
已經有19人回復
- HPLC氣路連接問題？？？？？？？？？？？？？
已經有8人回復
- 用HPLC法測定 流動相如何配制？ 謝謝
已經有5人回復
- Agilent HPLC 1200 的基線問題
已經有17人回復
- 求助各位，總黃酮含量測定方法用比色法和HPLC哪個更合適呢？
已經有16人回復
- 請教HPLC一些問題
已經有16人回復
- 【求助】HPLC 問題分析
已經有8人回復
- 【求助】關于HPLC
已經有9人回復
騷年木子2
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 9.3
- 散金: 5
- 帖子: 74
- 在線: 10.5小時
- 蟲號: 3466482
- 注冊: 2014-10-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 藥物分析
2樓2014-11-02 20:54:21
3樓2016-05-10 23:15:26
4樓2017-09-03 07:15:49
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 qijing2010 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工調劑 +5 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 303求調劑 +4 | 元夕元 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 328求調劑 +4 | LHHL66 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +10 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南大學化學學碩0703總分337求調劑 +4 | niko- 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調劑 +3 | α____ 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學071000 329分求調劑 +5 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 324求調劑 +6 | lucky呀呀呀鴨 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學 ，070300化學學碩，總分287，雙非一本，求調劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 354求調劑 +7 | Tyoumou 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 294求調劑材料與化工專碩 +15 | 陌の森林 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學，生物學，301分，求調劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調劑 324分 +10 | llllkkkhh 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 【同濟軟件】軟件（085405）考研求調劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26博士申請 +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研求調劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|