 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 48 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 10056 | 回復(fù): 47 | |||||||||||||||
| 【獎勵】 本帖被評價42次，作者juanjuanzi增加金幣 29.8 個 | |||||||||||||||
[資源]
【分享】細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)個人總結(jié)1
|
|||||||||||||||
|
總結(jié)---細(xì)胞培養(yǎng) 一． 基本理論概論 原代培養(yǎng): 也叫初代培養(yǎng)，指直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的第一次的培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：將細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個培養(yǎng)瓶即稱為傳代或傳代培養(yǎng)。 細(xì)胞系：原代培養(yǎng)物成功傳代后，則稱之為細(xì)胞系。(如細(xì)胞系的生存期有限，則稱之為有限細(xì)胞系；已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系，稱連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系。) 細(xì)胞株：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。 培養(yǎng)類型：細(xì)胞培養(yǎng)，組織培養(yǎng)，器官培養(yǎng)。 細(xì)胞生長的方式：貼附生長，懸浮生長 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)（形態(tài)不一定，環(huán)境改變形態(tài)可能改變）：成纖維性型細(xì)胞，上皮型細(xì)胞（單層膜樣生長），游走性細(xì)胞（游散生長，常有偽足跟突起） 二． 培養(yǎng)過程及要點（切記無菌操作） （一） 工作環(huán)境的處理 1. 實驗進(jìn)行前，無菌室及無菌操作臺以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 % 酒精擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70 % 酒精擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘以上后，再進(jìn)行下一個細(xì)胞株之操作。 2. 實驗用品以70 %酒精擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在臺面之中央無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。 3. 小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。吸管口切勿碰到容器瓶口 4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套后才進(jìn)行實驗。對于來自人類或是病毒 感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少Class II)。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。 5. 定期檢測下列項目： CO2 鋼瓶之CO2 壓力 。CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水，每周更換)。 無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)(300 小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750)，定期更換水槽的水。 （二） 試驗用玻璃塑料用品清洗及其消毒滅菌 清洗： （1） 玻璃器皿的清洗（酸液由重鉻酸鉀，濃硫酸，蒸餾水配置） 浸泡—刷洗—浸酸—沖洗 （2） 膠塞的清洗 剛買回的常含滑石粉等雜質(zhì)，先用自來水沖洗后再按常規(guī)方法處理。2%NaoH或洗衣粉煮沸10-20分鐘---1%稀Hcl浸泡30分鐘或蒸餾水沖洗后再煮沸10-20分鐘—晾干備用 （3） 塑料制品的清洗 2%NaoH浸泡過夜—自來水沖洗--5%稀Hcl浸泡30分鐘—自來水和蒸餾水沖干備用。 消毒： （1） 物理消毒法（紫外線，濕熱，烘干，過濾）含碳酸氫鈉溶液要過濾，高壓會分解，培養(yǎng)液、平衡鹽溶液及其它需要滅菌的液體：121℃, 15 磅, 20 分鐘；布類、玻璃制品、金屬器械等物品：先121℃, 15 磅, 20 分鐘，然后在烘箱中烘干；玻璃瓶：干熱滅菌170℃, 4 小時。 （2） 化學(xué)消毒法（70%酒精，千分之一的新潔爾滅） （3） 抗生素：培養(yǎng)用液滅菌或預(yù)防培養(yǎng)物污染 （三）培養(yǎng)物的污染及控制 污染種類： （1） 細(xì)菌污染：培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡。 （2） 真菌污染：培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。 （3） 支原體污染：培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后，部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長增殖變慢，部分細(xì)胞變圓，從瓶壁脫落。但多數(shù)細(xì)胞污染后無明顯變化，或略有變化，若不及時處理，還會產(chǎn)生交叉污染。 （4） 病毒污染：盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。 （5） 非同種細(xì)胞污染： 污染來源： （1） 不潔的動物組織標(biāo)本：正常情況下組織來源是不帶菌的，但由于取材不小心也會染菌，也有可能動物體本身帶菌，不用濃的抗生素清洗，會導(dǎo)致培養(yǎng)污染。 （2） 空氣：如果無菌操作區(qū)與外界隔離不嚴(yán)，空氣中會帶菌。其次，超凈臺使用過久，濾板堵塞也會污染。工作時不帶口罩外界氣流過強(qiáng)會污染。再者，南方空氣潮濕，空氣中容易帶菌，操作不注意會染菌。 （3） 清洗消毒：培養(yǎng)用液除菌不徹底，培養(yǎng)器具清洗消毒不徹底。 （4） 操作不過關(guān) 1、 實驗前未檢查器械和液體是否污染 2、 操作者未帶口罩帽子，呼出空氣中含細(xì)菌和支原體 3、 培養(yǎng)瓶未用75%酒精擦拭和灼燒 4、 操作不當(dāng)吸管或培養(yǎng)用品接觸到污染物，如皮膚，瓶壁 5、 操作者說話大聲，來回走動，揚(yáng)起灰塵。 預(yù)防和控制 污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價值不大，宜棄之；在尋找原因后徹底消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再培養(yǎng)。 預(yù)防 1、 培養(yǎng)用液、器皿要清洗消毒，防止污染。無菌室無菌器械要定期消毒 2、 操作者要細(xì)心穩(wěn)重。進(jìn)入無菌是前要用肥皂洗手，穿好隔離衣帽口罩，檢查物品無污染。進(jìn)入室內(nèi)要少說話走動打噴嚏要向背后，用酒精棉球擦手，瓶口，并灼燒瓶口。用酒精擦臺面，在超凈臺中央操作，切勿一根吸管用到底，要更換吸管，操作時吸管不能碰到培養(yǎng)瓶口，防止污染，試驗完成要做好標(biāo)記。臨走帶走物品，用酒精擦臺面。不可直接進(jìn)行下一個試驗。 3、 防止細(xì)胞交叉污染，及早留種保持，防止污染 控制 （一）、使用抗生素：一般對細(xì)菌有用。預(yù)防用藥比污染后用藥好，聯(lián)合用藥比單獨用藥好。一般用青霉素100u/ml,鏈霉素100ug/ml，清除用藥是常量的5-10倍采用5～10倍于常用量的沖擊法，加入高濃度抗生素后作用24～48h，再換入常規(guī)培養(yǎng)物，有時可能奏效�？股爻Ｓ昧亢托Ч绻拢� 抗生素 細(xì)菌 真菌 支原體 常用量 青霉素 G＋ 100u/ml 鏈霉素 G－ 100ug/ml 慶大霉素 G+/G- 200ug/ml 四環(huán)素 G+/G- 10ug/ml 卡那霉素 G+/G- 50ug/ml 兩性霉素B + 2ug/ml 制霉菌素 + 25ug/ml (二)、加溫除菌：根據(jù)支原體不耐熱的特點，可將受支原體污染的細(xì)胞至于41攝氏度作用5～10h（最長可達(dá)18h），以殺滅支原體。但41攝氏度對細(xì)胞本身也有較大影響，故在處理前應(yīng)先進(jìn)行預(yù)實驗，確定出最大限度殺傷支原體而對細(xì)胞影響較小的最佳處理時間。 （三）、使用支原體特異性血清：抗血清結(jié)合支原體。一般支原體污染無太大價值均棄掉。 （四）、其他方法：動物體內(nèi)接種除菌，加巨噬細(xì)胞。 動物體內(nèi)接種：受污染的腫瘤細(xì)胞可接種在同種動物皮下或腹腔內(nèi)，利用動物的免疫功能消滅污染的微生物，而腫瘤細(xì)胞卻能在動物體內(nèi)繼續(xù)生長，待一定時間后從體內(nèi)取出腫瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。 與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)：巨噬細(xì)胞在體外可存活7～10天，并保持吞噬、消化微生物的能力。利用這一特點，可將少量的污染細(xì)胞與足夠量的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，從而消除污染。 [ Last edited by juanjuanzi on 2010-7-9 at 09:54 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 細(xì)胞生物學(xué)實驗經(jīng)驗 | 細(xì)胞培養(yǎng) | 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) | 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與工藝 |
| 細(xì)胞培養(yǎng) | 細(xì)胞培養(yǎng) | 觀-精-記 | 細(xì)胞培養(yǎng) |
| 細(xì)胞培養(yǎng) | 做科研必讀 | 資源 | Be myself |
| 我的資源 |
» 猜你喜歡
江蘇省優(yōu)青門檻
已經(jīng)有20人回復(fù)
-
心好累。今年我們部門提交了18個項目。中了11了，可惜我的又掛了
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
植物學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有110人回復(fù)
-
面上項目計劃書
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
面上項目計劃書附件
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
面上項目計劃書系統(tǒng)狀態(tài)
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
NSFC-UNEP（與聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署）合作項目
已經(jīng)有33人回復(fù)
-
和伊朗人合作
已經(jīng)有32人回復(fù)
-
江蘇省自然基金
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
生命科學(xué)新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 【資料】細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)資料匯總
已經(jīng)有415人回復(fù)
- 養(yǎng)細(xì)胞的技術(shù)，心得
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 【推薦】干細(xì)胞牛人
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【原創(chuàng)】細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)自己的總結(jié)
已經(jīng)有51人回復(fù)
2樓2010-07-09 09:36:32
3樓2010-07-09 10:19:07
8樓2010-07-15 12:44:40
16樓2011-07-10 14:34:00
4樓2010-07-09 17:02:16
5樓2010-07-12 08:37:14
6樓2010-07-14 16:19:31
7樓2010-07-14 19:29:57
9樓2010-07-15 18:43:46
11樓2010-08-23 22:53:46
13樓2010-08-30 21:54:42
14樓2010-08-31 11:11:04
15樓2010-10-22 14:08:59
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
17樓2011-07-10 22:20:53
19樓2011-07-20 12:00:33
20樓2012-01-31 06:51:01
22樓2012-02-16 22:17:05
23樓2012-03-14 14:37:20
24樓2012-03-22 09:54:10
 本帖僅樓主可見 |
25樓2012-05-12 20:16:44
26樓2012-07-05 08:47:36
27樓2012-07-05 11:03:31
29樓2012-09-16 09:21:37
30樓2013-03-03 13:17:50
31樓2013-03-21 20:44:42
32樓2013-05-25 10:26:11
33樓2013-06-13 20:31:10
35樓2013-06-27 23:43:23
36樓2013-11-20 22:50:28
37樓2013-12-02 21:21:27
38樓2014-07-09 20:14:45
40樓2014-11-23 19:10:48
41樓2014-11-27 22:49:07
44樓2016-01-23 18:11:50
46樓2016-10-06 16:06:44
47樓2017-03-14 05:31:16
簡單回復(fù)
waiter10樓
2010-07-24 16:23
回復(fù)
好。
啄木鳥swc12樓
2010-08-30 09:20
回復(fù)
謝謝分享！
jhu132llh18樓
2011-07-11 16:05
回復(fù)
五星好評 
bigboy88110621樓
2012-02-07 17:28
回復(fù)
五星好評 
nancyzhy28樓
2012-07-19 23:37
回復(fù)
五星好評
凌波麗34樓
2013-06-20 17:26
回復(fù)
五星好評 
舟之行39樓
2014-08-17 21:36
回復(fù)
一般 
LOVE雪兒42樓
2014-12-25 13:38
回復(fù)
五星好評
憐兒新43樓
2015-12-11 10:40
回復(fù)
三星好評
楚寒冰45樓
2016-02-14 15:21
回復(fù)
五星好評 
十口日月48樓
2022-01-03 09:49
回復(fù)
五星好評 棒
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 juanjuanzi 的主題更新
| 48 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑(一志愿湖南大學(xué)070300) +5 | 番茄頭--- 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | 某某某某位 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿211 初試270分 求調(diào)劑 +4 | 谷雨上岸 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工考研調(diào)劑
+4
|
孅華 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 冬十三 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)調(diào)劑 +5 | Surekei 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +4 | plum李子 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +12 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +12 | yangfz 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | 睿08 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程（專）一志愿985 初試335求調(diào)劑 +3 | hiloiy 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能專碩317求調(diào)劑（0854都可以） +4 | xbxudjdn 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|