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xtcao668至尊木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】釀酒酵母表達(dá)載體的構(gòu)建問題 已有4人參與
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我在構(gòu)建釀酒酵母表達(dá)載體時(shí)遇到一個(gè)問題，請(qǐng)各位幫忙。 由于用的酵母受體菌為工業(yè)菌株，缺乏必要的篩選標(biāo)記，想在表達(dá)載體上加入KAN基因抗性，用G418去篩選轉(zhuǎn)化子。 問題是如果把KAN基因表達(dá)載體啟動(dòng)子后面，接下來再是要表達(dá)的基因片段，請(qǐng)問各位這樣是不是基因片段不能表達(dá)啊？ 盼高人指導(dǎo)！ 謝謝！ |
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2樓2010-07-16 11:57:17
susizheng
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3樓2010-07-16 14:57:45
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xtcao668(金幣+1): 2010-07-16 15:04:08
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不知道你的工作是做工程酵母還是構(gòu)建載體，如果做工程酵母，建議前期還是用實(shí)驗(yàn)室菌株，篩選標(biāo)記很多。另外也有工業(yè)菌株帶篩選標(biāo)記的，BY4741，BY4742 如果是要構(gòu)建載體，建議獲得抗性基因時(shí)構(gòu)建完整的抗性基因表達(dá)元件，插入到載體啟動(dòng)子前面，而不是啟動(dòng)子后面。（載體pUG6上有完整的TEF1p-kanMX-TEF1t元件，用于敲除，你可以擴(kuò)增下來當(dāng)篩選標(biāo)記） |
4樓2010-07-16 15:02:40
wurenzhi0721
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5樓2012-08-14 22:37:09
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