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【求助】mPEG-mal,mPEG-COOH 已有5人參與
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mPEG-mal,mPEG-COOH 兩者都可以與帶有賴氨酸的小肽偶合嗎？ 還是直接與小肽的NH2末端偶聯(lián)的？ 非常感謝！ |
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2樓2010-07-19 18:47:16
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3樓2010-07-19 18:54:32
4樓2010-07-19 19:30:03
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5樓2010-07-19 20:27:10
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蝸牛VS蝸牛(金幣+3):在理，謝謝 2010-07-20 13:54:39
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其實(shí) 我覺得 PEG-mal 主要是可以定位的結(jié)合到某些位置，有些研究可以在蛋白質(zhì)表達(dá)過程中，在一些不影響蛋白質(zhì)功能的地方引進(jìn)巰基。這樣PEG修飾的時(shí)候就可以特異性的結(jié)合到設(shè)計(jì)位置。也可以控制每個(gè)分子修飾的PEG數(shù)量。 而PEG-COOH，只要可以就會(huì)和氨基結(jié)合。不能特異性結(jié)合到某個(gè)氨基酸上，同時(shí) 同一個(gè)房子的PEG修飾的數(shù)目也不容易控制。 |
6樓2010-07-20 12:04:45
qingbo62
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蝸牛VS蝸牛(金幣+10):謝謝 2010-07-20 17:41:53
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樓上兩位基本上都說了，那我再補(bǔ)充幾點(diǎn)： 1、COOH與NH2的反應(yīng)比Mal與SH的反應(yīng)要慢的多，前者往往需要12-24小時(shí)以后，后者只需要1-3小時(shí)，就是Mal體系的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)。 因此，前一個(gè)反應(yīng)較慢。 2、COOH與NH2的反應(yīng)需要催化劑，一般是用EDC或EDC+NHS(sulfo)，在用EDC活化以后，產(chǎn)生的中間體是一個(gè)酰基脲，這個(gè)結(jié)構(gòu)容易參與親核反應(yīng)，比如NH2、SH、H2O都會(huì)與它反應(yīng)，因?yàn)樗母狈磻?yīng)比較多。另外，在于NH2反應(yīng)后，另外一個(gè)副產(chǎn)物是脲。 因此，這個(gè)反應(yīng)副反應(yīng)較多，且有副產(chǎn)物，可能需要除去。 3、因?yàn)楹芏嗟鞍谆蛘叨嚯闹卸际峭瑫r(shí)含有COOH與NH2的，所以用EDC體系有可能會(huì)導(dǎo)致蛋白與多肽之間或者自身的反應(yīng)。 另外，因?yàn)榈鞍资怯谢钚晕稽c(diǎn)的，有些極端情況下會(huì)影響蛋白的活性。 因此，很多人在合成多肽時(shí)會(huì)在末端加入一個(gè)（半）肽氨酸，或者在構(gòu)建抗體序列時(shí)加入一段含SH的序列。 4、NH2變成SH。用SPDP的話，還有一步就是用DTT或者其他還原性物質(zhì)把S-S鍵斷裂反應(yīng)SH，再與Mal反應(yīng)，這樣比較麻煩，而且還原物質(zhì)或者除不徹底，會(huì)影響SH與Mal的反應(yīng)。 可以嘗試用iminothiolane，一步反應(yīng)，比較方便。 另外，用SH與Mal的反應(yīng)還有一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，就是比較容易跟蹤反應(yīng)進(jìn)行的程度，好像是用DTNB。 以上就是二者的區(qū)別，但其實(shí)看文獻(xiàn)的話，有非常多的人用COOH與NH2的反應(yīng)接蛋白或者多肽，你可以試一下，只要反應(yīng)效率還可以，有活性就可以繼續(xù)往下做。 |
7樓2010-07-20 15:35:37
8樓2010-07-20 17:42:18
逍萍萍
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9樓2014-07-26 16:54:12
逍萍萍
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10樓2014-07-26 16:55:30
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