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[交流]
【求助】mPEG-mal,mPEG-COOH 已有5人參與
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mPEG-mal,mPEG-COOH 兩者都可以與帶有賴氨酸的小肽偶合嗎？ 還是直接與小肽的NH2末端偶聯(lián)的？ 非常感謝！ |
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qingbo62
木蟲 (正式寫手)
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
蝸牛VS蝸牛(金幣+10):謝謝 2010-07-20 17:41:53
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
蝸牛VS蝸牛(金幣+10):謝謝 2010-07-20 17:41:53
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樓上兩位基本上都說了，那我再補(bǔ)充幾點： 1、COOH與NH2的反應(yīng)比Mal與SH的反應(yīng)要慢的多，前者往往需要12-24小時以后，后者只需要1-3小時，就是Mal體系的一個優(yōu)點。 因此，前一個反應(yīng)較慢。 2、COOH與NH2的反應(yīng)需要催化劑，一般是用EDC或EDC+NHS(sulfo)，在用EDC活化以后，產(chǎn)生的中間體是一個酰基脲，這個結(jié)構(gòu)容易參與親核反應(yīng)，比如NH2、SH、H2O都會與它反應(yīng)，因為它的副反應(yīng)比較多。另外，在于NH2反應(yīng)后，另外一個副產(chǎn)物是脲。 因此，這個反應(yīng)副反應(yīng)較多，且有副產(chǎn)物，可能需要除去。 3、因為很多蛋白或者多肽中都是同時含有COOH與NH2的，所以用EDC體系有可能會導(dǎo)致蛋白與多肽之間或者自身的反應(yīng)。 另外，因為蛋白是有活性位點的，有些極端情況下會影響蛋白的活性。 因此，很多人在合成多肽時會在末端加入一個（半）肽氨酸，或者在構(gòu)建抗體序列時加入一段含SH的序列。 4、NH2變成SH。用SPDP的話，還有一步就是用DTT或者其他還原性物質(zhì)把S-S鍵斷裂反應(yīng)SH，再與Mal反應(yīng)，這樣比較麻煩，而且還原物質(zhì)或者除不徹底，會影響SH與Mal的反應(yīng)。 可以嘗試用iminothiolane，一步反應(yīng)，比較方便。 另外，用SH與Mal的反應(yīng)還有一個優(yōu)點，就是比較容易跟蹤反應(yīng)進(jìn)行的程度，好像是用DTNB。 以上就是二者的區(qū)別，但其實看文獻(xiàn)的話，有非常多的人用COOH與NH2的反應(yīng)接蛋白或者多肽，你可以試一下，只要反應(yīng)效率還可以，有活性就可以繼續(xù)往下做。 |
7樓2010-07-20 15:35:37
2樓2010-07-19 18:47:16
薰衣草兒
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3樓2010-07-19 18:54:32
4樓2010-07-19 19:30:03
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