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[交流]
【求助】mPEG-mal,mPEG-COOH 已有5人參與
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mPEG-mal,mPEG-COOH 兩者都可以與帶有賴氨酸的小肽偶合嗎? 還是直接與小肽的NH2末端偶聯(lián)的? 非常感謝! |
榮譽版主 (知名作家)
♡花語の戀♡

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捐助貴賓 (正式寫手)

木蟲 (正式寫手)
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樓上兩位基本上都說了,那我再補充幾點: 1、COOH與NH2的反應比Mal與SH的反應要慢的多,前者往往需要12-24小時以后,后者只需要1-3小時,就是Mal體系的一個優(yōu)點。 因此,前一個反應較慢。 2、COOH與NH2的反應需要催化劑,一般是用EDC或EDC+NHS(sulfo),在用EDC活化以后,產(chǎn)生的中間體是一個;,這個結(jié)構(gòu)容易參與親核反應,比如NH2、SH、H2O都會與它反應,因為它的副反應比較多。另外,在于NH2反應后,另外一個副產(chǎn)物是脲。 因此,這個反應副反應較多,且有副產(chǎn)物,可能需要除去。 3、因為很多蛋白或者多肽中都是同時含有COOH與NH2的,所以用EDC體系有可能會導致蛋白與多肽之間或者自身的反應。 另外,因為蛋白是有活性位點的,有些極端情況下會影響蛋白的活性。 因此,很多人在合成多肽時會在末端加入一個(半)肽氨酸,或者在構(gòu)建抗體序列時加入一段含SH的序列。 4、NH2變成SH。用SPDP的話,還有一步就是用DTT或者其他還原性物質(zhì)把S-S鍵斷裂反應SH,再與Mal反應,這樣比較麻煩,而且還原物質(zhì)或者除不徹底,會影響SH與Mal的反應。 可以嘗試用iminothiolane,一步反應,比較方便。 另外,用SH與Mal的反應還有一個優(yōu)點,就是比較容易跟蹤反應進行的程度,好像是用DTNB。 以上就是二者的區(qū)別,但其實看文獻的話,有非常多的人用COOH與NH2的反應接蛋白或者多肽,你可以試一下,只要反應效率還可以,有活性就可以繼續(xù)往下做。 |
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