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maggie3277木蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】蛋白誘導(dǎo)表達(dá)不出目標(biāo)條帶 已有22人參與
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| 請(qǐng)教各位蟲(chóng)友，最近做重組蛋白的表達(dá)。但在大腸桿菌內(nèi)重組的pet28a總表達(dá)不出我的目標(biāo)條帶，IPTG誘導(dǎo)濃度也設(shè)置了梯度，溫度也設(shè)定了梯度。但就是沒(méi)有我的目標(biāo)條帶的生成。請(qǐng)問(wèn)有蟲(chóng)友遇到過(guò)類似情況，構(gòu)建好的質(zhì)粒卻表達(dá)不出條帶的情況嗎？ |
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kfsh
銀蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
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- 在線: 49.9小時(shí)
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- 注冊(cè): 2011-09-29
- 專業(yè): 生物化學(xué)
41樓2011-12-20 16:56:49
小白3521
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2010-07-23 23:28:47
lwiaanngg
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 46 (小學(xué)生)
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- 蟲(chóng)號(hào): 43541
- 注冊(cè): 2004-04-10
- 專業(yè): 應(yīng)用高分子化學(xué)與物理
3樓2010-07-24 00:11:56
sunyongle1
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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- 金幣: 2638.8
- 散金: 1
- 帖子: 413
- 在線: 103.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1059232
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- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):感謝分享經(jīng)驗(yàn)~~ 2010-07-24 12:45:46
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):感謝分享經(jīng)驗(yàn)~~ 2010-07-24 12:45:46
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我也遇到過(guò)一次，而且片段不是很長(zhǎng)的那種。原來(lái)我用全長(zhǎng)序列倒是表達(dá)出來(lái)了，只是量很低。后來(lái)就用了部分片段，沒(méi)想到，就沒(méi)有了。也不知道什么原因。 建議：首先保證測(cè)序正確（其實(shí)只要不發(fā)生移碼突變之類，也應(yīng)該表達(dá)出來(lái)啊）；你的序列是不是有稀有密碼子；你的序列疏水區(qū)，信號(hào)肽，跨膜域這些都會(huì)影響表達(dá)；蛋白很大的話，也會(huì)影響它的表達(dá)。 不知道樓主是用來(lái)干什么呢？制備抗原，分析酶活？ |
4樓2010-07-24 08:04:55
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