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【求助/交流】酶解法做根尖染色體鑒定必須用Giemsa 染色液染色嗎? 已有2人參與
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酶解法做根尖染色體鑒定必須用Giemsa 染色液染色嗎? Giemsa 染色液比較難的配制 那我直接用改良品紅來(lái)染色 可以不呢? 染了色還需要蓋蓋玻片不呢? 希望好心人指點(diǎn)一二哦!! 實(shí)驗(yàn)步驟: 根尖染色體觀察 (1)材料的準(zhǔn)備:選擇生長(zhǎng)旺盛的植株,然后將根尖用剪刀去掉老根,放在清水中,可以適當(dāng)加些肥料如尿素等,但注意不能過(guò)量,經(jīng)常換水,待根尖長(zhǎng)到1厘米時(shí),選擇生長(zhǎng)粗壯的根尖剪下,用0.002%的8-羥基喹啉預(yù)處理2~3小時(shí)(處理時(shí)溫度不要太高,最好保持在25℃以下),再把根尖轉(zhuǎn)移到Carnoy's溶液中固定1~24小時(shí),如果能馬上進(jìn)行處理更好,如果不能則保存在70%的酒精中,4℃保存?zhèn)溆谩? (2)根尖的處理:取出保存的根尖,用水充分沖洗,在37℃溫度下酶解 (2.5%的纖維素酶和1.0%的果膠酶)2~2.5小時(shí),用針尖壓根尖,應(yīng)有“軟”的感覺(jué),不軟則染色體不易分散開(kāi),太軟則染色體容易丟失,具體的時(shí)間依照根尖的生長(zhǎng)情況而定。 (3)涂片:酶解完成后,用水充分沖洗根尖,取少量的分生區(qū)在潔凈的載玻片上進(jìn)行涂片(一個(gè)根尖可以做幾個(gè)涂片),注意不能太多,否則會(huì)造成細(xì)胞重疊。為了分散良好,用乙酸和甲醛按照1∶3的比例配制新鮮的混合液,取一滴滴在材料上,細(xì)胞會(huì)自然鋪展開(kāi)來(lái),效果不錯(cuò)。之后立即用火焰干燥或者自然干燥,二者的區(qū)別不大。 (4)染色:改良品紅染色。??? (5)觀察和照相:預(yù)先在普通的光學(xué)顯微鏡上進(jìn)行初步篩選,選取分散良好染色適度的片子在激光共聚焦顯微鏡上觀察并照相。 |

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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