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【求助/交流】酶解法做根尖染色體鑒定必須用Giemsa 染色液染色嗎？ 已有2人參與
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酶解法做根尖染色體鑒定必須用Giemsa 染色液染色嗎？ Giemsa 染色液比較難的配制 那我直接用改良品紅來(lái)染色 可以不呢？ 染了色還需要蓋蓋玻片不呢? 希望好心人指點(diǎn)一二哦！�。� 實(shí)驗(yàn)步驟： 根尖染色體觀察 (1)材料的準(zhǔn)備：選擇生長(zhǎng)旺盛的植株，然后將根尖用剪刀去掉老根，放在清水中，可以適當(dāng)加些肥料如尿素等，但注意不能過(guò)量，經(jīng)常換水，待根尖長(zhǎng)到1厘米時(shí)，選擇生長(zhǎng)粗壯的根尖剪下，用0.002％的8-羥基喹啉預(yù)處理2～3小時(shí)(處理時(shí)溫度不要太高，最好保持在25℃以下)，再把根尖轉(zhuǎn)移到Carnoy's溶液中固定1～24小時(shí)，如果能馬上進(jìn)行處理更好，如果不能則保存在70％的酒精中，4℃保存?zhèn)溆谩? (2)根尖的處理：取出保存的根尖，用水充分沖洗，在37℃溫度下酶解 (2.5％的纖維素酶和1.0％的果膠酶)2～2.5小時(shí)，用針尖壓根尖，應(yīng)有“軟”的感覺(jué)，不軟則染色體不易分散開(kāi)，太軟則染色體容易丟失，具體的時(shí)間依照根尖的生長(zhǎng)情況而定。 (3)涂片：酶解完成后，用水充分沖洗根尖，取少量的分生區(qū)在潔凈的載玻片上進(jìn)行涂片(一個(gè)根尖可以做幾個(gè)涂片)，注意不能太多，否則會(huì)造成細(xì)胞重疊。為了分散良好，用乙酸和甲醛按照1∶3的比例配制新鮮的混合液，取一滴滴在材料上，細(xì)胞會(huì)自然鋪展開(kāi)來(lái)，效果不錯(cuò)。之后立即用火焰干燥或者自然干燥，二者的區(qū)別不大。 (4)染色：改良品紅染色。？？？ (5)觀察和照相：預(yù)先在普通的光學(xué)顯微鏡上進(jìn)行初步篩選，選取分散良好染色適度的片子在激光共聚焦顯微鏡上觀察并照相。 |
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2樓2010-07-29 19:20:02
lixg
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2010-07-30 08:00:30
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