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【求助】分離分子量為3000--4000的小分子肽,用G-25凝膠分不開,請大俠指教。 已有2人參與
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如題 ,感激不盡 |
鐵蟲 (小有名氣)
鐵蟲 (小有名氣)
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對于凝膠過濾來說,許多因素影響最終的分離效果:上樣體積、上樣體積與柱床體積比、柱子的直徑、顆粒大小、顆粒大小分布、裝填密度、孔徑大小、流速以及樣品的粘稠度等。 1、理論上說,分子篩能上樣至柱床體積30%。但為了實(shí)現(xiàn)精確分離一般保持上樣體積與柱床體積比為0.5%-4%。在一定范圍內(nèi),上樣體積越小分離效果越好。 2、凝膠顆粒越小,溶質(zhì)擴(kuò)散越快,從而峰形顯得細(xì)而尖銳。反之,顆粒越大,擴(kuò)散越慢,峰變得寬而平。 3、柱子細(xì)而高可以提高分離度。一般來說,柱子提高一倍,分離效果提升40%。 4、流速越小,分離效果越好。因?yàn)榇蠓肿訌耐馑w積直接通過,小分子進(jìn)入填料空隙內(nèi),流速越小,壓力越小,小分子在空隙內(nèi)速度越慢,跟大分子越容易分開。 5、樣品最好濃縮,以提高純化效率。 建議:使用顆粒細(xì)小的G25填料,如果有多根可以串聯(lián)起來以增加柱床高度,適當(dāng)降低流速 |
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