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playboy723金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的問題 已有1人參與
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大家有做逆轉(zhuǎn)錄病毒的嗎？我現(xiàn)在遇到了一些問題想向大家請(qǐng)教一下： 首先是感染效率太低，我用的是PLAT-E包裝細(xì)胞，病毒是小鼠moloney病毒，6cm dish轉(zhuǎn)染8ug質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染效率有70%左右，換液后36h出毒，之后24h第二次出毒，加4ug/ml polybrene感染小鼠成纖維細(xì)胞（分別感染6h），兩次感染后48h觀察熒光發(fā)現(xiàn)感染率不到30%，也就20左右，這么低的效率我都沒有辦法繼續(xù)做下游的實(shí)驗(yàn)了，大家有做過(guò)的嗎？請(qǐng)教一下如何提高感染的效率？可能的問題會(huì)是在哪里？出毒少還是感染條件不好，請(qǐng)大家指教！謝謝 另一個(gè)問題是有時(shí)候感染后的細(xì)胞會(huì)全部死亡，有好幾次這樣的情況，有時(shí)是感染后換液時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞已經(jīng)死亡，有時(shí)是換液時(shí)細(xì)胞還好好的，換液后24h細(xì)胞全部死亡。我不知道怎么會(huì)出現(xiàn)這樣的情況，難道是病毒液太酸了？不會(huì)吧，我見過(guò)那48h后的病毒液感染細(xì)胞也沒有問題的，或者是病毒太多了造成細(xì)胞死亡？好像也不是這個(gè)問題，因?yàn)楫吘垢腥韭蔬B30%都不到！真的很頭疼，請(qǐng)高手幫我一下吧 不勝感激！謝謝 |
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2樓2016-06-01 09:55:47
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