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sqhnsd金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】反相HPLC分離蛋白質(zhì) 已有3人參與
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| 有沒有做過RP-HPLC分離蛋白的？交流一下， 我最近做的比較郁悶，分離效果不好 |
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2樓2010-08-13 12:54:33
sqhnsd
金蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
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你好，我的問題： http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=2285152&fpage=3 你可以看看我的圖。 我的樣品制備過程如下： 樣品為大腸桿菌全蛋白，SDS-PAGE后按照分子量進(jìn)行分離，后將不同分子量蛋白進(jìn)行電洗脫，然后通過透析+丙酮沉淀去除鹽和SDS，A、B圖分離效果比較理想，分子量介于10-20 kDa組分，不同組分間上樣量差別不大（2倍左右）。 可能的問題： 1.SDS沒有除干凈：這個不太可能，A、B分離還挺好，其他組分也都是同樣的處理方式。 2.分子量大影響分離：C8柱子Pore size 300 A，之后換了pore size 為1000 A的（C含量介于C4 -C8）R2柱子，分離效果沒有改善。 3. 流速：流速快可能影響傳質(zhì)效率，因此，在R2柱子上將流速降為0.5ml/min，其他條件不變，分離效果仍然沒有改善。 所以，現(xiàn)在我不知道問題出在哪里，請高手指點。 |
3樓2010-08-13 13:18:04
sqhnsd
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4樓2010-08-13 13:18:58
5樓2010-08-13 14:12:31
sqhnsd
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6樓2010-08-13 15:15:52
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