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xing1789銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】虛心請(qǐng)教 已有3人參與
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想請(qǐng)教幾個(gè)問(wèn)題: 一:昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)載體,pfastbacI和pfastBAcdua,這兩個(gè)表達(dá)載體可以連接多大的目的片段l(最大能多大). 二:在提取重組桿粒的時(shí)候除了用手提提取之外,是否可以用Kit提取?如果可以用什么樣的Kit?什么廠家? 三:用手提提取重組桿粒的時(shí)候,加完P(guān)1,P2,P3,離心之后上清液用無(wú)水乙醇沉淀?xiàng)U粒和異丙醇沉淀?xiàng)U粒哪個(gè)效果更好一些?怎樣增加桿粒的純度?減少蛋白的含量? 四:在做轉(zhuǎn)染的時(shí)候細(xì)胞為什么沒(méi)有變化?感染72小時(shí)細(xì)胞沒(méi)有protocol說(shuō)的那樣細(xì)胞出現(xiàn)停止生長(zhǎng),膨脹等現(xiàn)象。是否可以說(shuō)明在做轉(zhuǎn)染的時(shí)候沒(méi)有做好?病毒的毒力不高導(dǎo)致這種現(xiàn)象? 五:做轉(zhuǎn)染的時(shí)候最好用那種轉(zhuǎn)染試劑? |
昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) |
新蟲(chóng) (小有名氣)
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一,目的片段的大小不太確定,可以對(duì)參考一些文獻(xiàn),看看大家都做了哪些 二,有很多kit,廠家可以再別的論壇上尋找一下,不過(guò)傳統(tǒng)法的效果也很好。 三,異丙醇和酒精都是有機(jī)溶劑,一般來(lái)講,提取質(zhì)粒的時(shí)候一開(kāi)始都要用異丙醇沉淀,因?yàn)楫惐汲恋淼男Ч靡恍詈蟠蠖嘤镁凭恋,因(yàn)榫凭菀讚]發(fā),對(duì)下游的實(shí)驗(yàn)影響小。上清可以先用異丙醇沉淀再用乙醇沉淀,不沖突。 吸液體的時(shí)候小心不要吸到蛋白即可。 四,首次轉(zhuǎn)染的病變不明顯,一般在4~5d才略有變化,但是收毒后將病毒重新接毒則在72hCPE非常明顯。 五,常用的有脂質(zhì)體2000 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
新蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (小有名氣)
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