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xing1789銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】虛心請(qǐng)教 已有3人參與
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想請(qǐng)教幾個(gè)問題： 一：昆蟲細(xì)胞表達(dá)載體，pfastbacI和pfastBAcdua,這兩個(gè)表達(dá)載體可以連接多大的目的片段l(最大能多大). 二:在提取重組桿粒的時(shí)候除了用手提提取之外,是否可以用Kit提取?如果可以用什么樣的Kit?什么廠家? 三:用手提提取重組桿粒的時(shí)候,加完P(guān)1,P2,P3,離心之后上清液用無水乙醇沉淀?xiàng)U粒和異丙醇沉淀?xiàng)U粒哪個(gè)效果更好一些？怎樣增加桿粒的純度?減少蛋白的含量? 四：在做轉(zhuǎn)染的時(shí)候細(xì)胞為什么沒有變化？感染72小時(shí)細(xì)胞沒有protocol說的那樣細(xì)胞出現(xiàn)停止生長，膨脹等現(xiàn)象。是否可以說明在做轉(zhuǎn)染的時(shí)候沒有做好？病毒的毒力不高導(dǎo)致這種現(xiàn)象？ 五：做轉(zhuǎn)染的時(shí)候最好用那種轉(zhuǎn)染試劑？ |
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 昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):感謝交流~ 2010-10-12 10:23:12
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一，目的片段的大小不太確定，可以對(duì)參考一些文獻(xiàn)，看看大家都做了哪些 二，有很多kit,廠家可以再別的論壇上尋找一下，不過傳統(tǒng)法的效果也很好。 三，異丙醇和酒精都是有機(jī)溶劑，一般來講，提取質(zhì)粒的時(shí)候一開始都要用異丙醇沉淀，因?yàn)楫惐汲恋淼男Ч靡恍�，但最后大多用酒精沉淀，因�(yàn)榫凭菀讚]發(fā)，對(duì)下游的實(shí)驗(yàn)影響小。上清可以先用異丙醇沉淀再用乙醇沉淀，不沖突。 吸液體的時(shí)候小心不要吸到蛋白即可。 四，首次轉(zhuǎn)染的病變不明顯，一般在4~5d才略有變化，但是收毒后將病毒重新接毒則在72hCPE非常明顯。 五，常用的有脂質(zhì)體2000 |
2樓2010-10-12 09:55:12
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4樓2015-11-22 15:11:09
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5樓2015-11-22 20:23:06
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