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zwx26_2006銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】酶切位點(diǎn)兩端都加了保護(hù)堿基受影響嗎 已有5人參與
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| 設(shè)計(jì)引物加酶切位點(diǎn)時(shí)，將酶切位點(diǎn)兩端的保護(hù)堿基都加上了，這樣連接時(shí)不受影響吧 |
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zjzz
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2樓2010-09-03 03:38:29
zwx26_2006
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3樓2010-09-03 09:13:14
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1.把引物單或引物管拿出來(lái)，看看上面的序列跟你定的是否一致。實(shí)驗(yàn)室曾經(jīng)有人收到差了一個(gè)堿基的，但是人家頂多幫你重新合成一份不會(huì)賠償你損失的時(shí)間 2.pcr片段先連TA克隆載體再切比直接切pcr線(xiàn)性片段好 3.外源質(zhì)粒片段確定酶切完全而不是很多單酶切？ 4.連接前電泳檢查酶切片段回收質(zhì)量是否可靠 5.連接前測(cè)外源質(zhì)粒片段和連接片段的的濃度，嚴(yán)格按摩爾比1：3到1：6配比連接 6.感受態(tài)的效率也很重要 |
4樓2010-09-07 02:40:37
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9樓2014-10-06 13:48:11
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