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jessiew000銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】如何選擇ISSR引物
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| 我是新手，正在看文獻(xiàn)和準(zhǔn)備做ISSR，DNA已經(jīng)提取好了，也知道有100個引物可以直接購買，但是不知道應(yīng)該如何選擇。我覺得好像沒必要把全部引物都買回來吧。希望有人幫我解決一下選擇引物的問題。到底選擇多少引物比較合適，如何選擇引物。謝謝！ |
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2樓2010-09-05 17:04:12
3樓2010-09-05 17:22:34
jessiew000
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9樓2011-05-13 09:50:55
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你先去查文獻(xiàn)，中文和外文的都要查全了，看別人有沒有做過你這個物種的，如果有的話，把他們的引物拿來用。但是最好的辦法就是100條全篩選一遍，不過你可以在相關(guān)文獻(xiàn)上查出每條引物的最適退火溫度或者選用一個溫度也行。初期篩選時，可以只選擇幾個模板，如果選擇3個模板，選擇一個溫度的話，也只不過300個PCR，4次PCR就做完了，很快的。如果要篩選最適退火溫度，也不難，頂多2400個PCR就夠了，我就這么搞的。你最好準(zhǔn)備一把排槍，點(diǎn)樣和加模板時就快了，我一星期就篩完引物了。祝你實驗順利��！ |
10樓2011-05-13 10:23:38
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