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bigboy123銅蟲 (小有名氣)
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【分享】看看我做的這個新型PCR增強(qiáng)劑效果怎么樣 已有16人參與
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這個是我偶然發(fā)現(xiàn)的一種物質(zhì)，可以有效提高PCR擴(kuò)增的產(chǎn)量，翻變所有文獻(xiàn)都沒有該物質(zhì)的介紹，因此對國產(chǎn)和進(jìn)口的Taq酶還比較有效。產(chǎn)品質(zhì)量可以穩(wěn)定了，正準(zhǔn)備請人公開測試。 掛個產(chǎn)品介紹和剛收到的一個電泳圖譜（朋友幫忙做的）在里面，愿意幫我做測試并給我發(fā)圖片的朋友可以聯(lián)系我，bsyan_cn@sina.com.cn,發(fā)短信也可以。  這個圖是朋友幫忙做的電泳圖，從左到右1-4是加入增強(qiáng)劑的，5-6是未加的。其他都是無關(guān)條帶。 |
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silicare(金幣+3):效果很好啊，分享一下吧 2010-09-19 12:25:58
silicare(金幣+3):效果很好啊，分享一下吧 2010-09-19 12:25:58
 費(fèi)了半天勁，終于傳上來了。不過這個有點(diǎn)夸張，一般人做不到這個程度。我做這個對比試驗(yàn)時，用的是國產(chǎn)最普通最便宜的Taq酶，現(xiàn)在大家用的Taq酶都比我用的質(zhì)量和價(jià)格都高了很多倍，所以不同質(zhì)量的酶之間應(yīng)該存在差異。 多次試驗(yàn)的總體感覺，PCR增強(qiáng)劑不會改變強(qiáng)樣本的Ct值和熒光信號最大強(qiáng)度，弱樣本的Ct值也不會改變，但能提高信號強(qiáng)度。原先信號太低的樣本就會超過閾值線而被檢出了，這樣可以提高試劑的靈敏度。 另外強(qiáng)調(diào)一下，熒光PCR反應(yīng)的好壞最終取決于所設(shè)計(jì)的引物和探針的質(zhì)量，增強(qiáng)劑只是在你實(shí)在沒辦法再改進(jìn)時，幫你通過提高PCR產(chǎn)物產(chǎn)量，再前進(jìn)一步而已。畢竟嘗試改變引物和探針可能對PCR效率的提高更加明顯，只是需要些運(yùn)氣而已。 |
7樓2010-09-09 19:04:11
bigboy123
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18樓2010-09-28 11:17:12
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5樓2010-09-09 12:32:33
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scelab(金幣+7):鼓勵新蟲！歡迎多來交流！:tiger06: 2010-09-09 23:02:24
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實(shí)時熒光PCR定量依據(jù)是模板剛開始出現(xiàn)擴(kuò)增時的循環(huán)數(shù)（Ct值）來進(jìn)行定量，不是根據(jù)PCR終產(chǎn)物來定量的。 一般Taq酶在PCR循環(huán)后期聚合活性和特異性都會下降，從而導(dǎo)致有效的擴(kuò)增效率下降，因此一般廠家都會添加一些亂七八糟的增強(qiáng)劑來延緩酶的衰竭，我這個由于是非文獻(xiàn)的東西，其工作機(jī)理也從沒有被報(bào)告過，對大家的Taq酶才適用。 在熒光PCR擴(kuò)增中，這個增強(qiáng)劑可以提高低拷貝樣本的熒光信號強(qiáng)度，可以與強(qiáng)樣本的擴(kuò)增信號強(qiáng)度相當(dāng)，對Ct值沒有改變，因此不會改變定量的準(zhǔn)確性。 因此我們才推測對低拷貝樣本的擴(kuò)增更有效些。 電泳法檢測的結(jié)果比較粗糙，主要是朋友隨便拿個樣本就給測了，還沒有來得及做梯度的PCR擴(kuò)增效果對比，過幾天結(jié)果就會上傳吧。 目前做過的試驗(yàn)有37度熱穩(wěn)定性，及反復(fù)凍融試驗(yàn)，只要試劑避光和避免反復(fù)開蓋，基本比較穩(wěn)定。如果還有什么需要測試的地方，歡迎提點(diǎn)建議，以及幫忙測試，我們將會萬分感謝。 |
6樓2010-09-09 18:42:25
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9樓2010-09-12 10:12:29
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10樓2010-09-19 11:14:56
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