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dongfangzz銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】PCR之后的產(chǎn)物與設(shè)計(jì)引物時(shí)產(chǎn)物的大小不符？ 已有5人參與
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我要做實(shí)時(shí)熒光定量PCR，提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄之后，以cDNA為模板PCR（引物是以mRNA序列設(shè)計(jì)的）。 PCR之后的產(chǎn)物跑電泳時(shí)與設(shè)計(jì)引物時(shí)產(chǎn)物的大小不符。設(shè)計(jì)引物時(shí)產(chǎn)物應(yīng)為170bp, 而實(shí)際產(chǎn)物為200多個(gè)bp。 這是怎么回事？ marker為DL1000DNA，共7個(gè)帶（100、200、300、400、500、700、1000）  連接看不到，再來一個(gè)。 http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=98985479lxqhk563rrgo7vt 不知是不是和RNA降解有關(guān)系? 先謝謝大家了! [ Last edited by dongfangzz on 2010-9-14 at 23:44 ] |
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dongfangzz
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我不知道呀，公司用primer3.0給設(shè)計(jì)的。設(shè)計(jì)后直接把文本文檔給發(fā)過來了，讓我比對(duì)。里面信息挺全的,。有一項(xiàng)說product size: 170. 部分原文件： ADDITIONAL OLIGOS start len tm gc% any 3' seq 2 LEFT PRIMER 184 20 60.11 55.00 2.00 1.00 gaccctgccttaccaactca RIGHT PRIMER 353 20 61.55 60.00 5.00 0.00 cactgtggagacgcccatac PRODUCT SIZE: 170, PAIR ANY COMPL: 3.00, PAIR 3' COMPL: 0.00 |
3樓2010-09-11 17:02:57
won7
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4樓2010-09-11 19:39:48
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5樓2010-09-12 09:55:04
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