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[交流]
【求助/交流】PCR問題求助
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| 請教高手一個問題，我做PCR的時候用上海生工DNA Taq polymerase（紅蓋子的）（退火溫度梯度從45度到65度）都能P出來，而且條帶很亮，但是用LA Taq polymerase、Ex Taq polymerase和Prime Star都P不出來。這是什么原因？ |
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是平行試驗，模板序列如下： ATGTGTTCTTCAATGACAATTAAATCGCTACAAGGTGATATTTTCTGGGGCCGGACCATGGATTACAACACCAGTTTCTTTCATGAATCACCAGTCGGCGGGGTTCCTGGTAAAATTGTCAGTTTGCCAGCAAACAAGGCATTACCAACACAAAGTGCCAAATGGACCACAAAGTATGCAGCGGTTGGCGTCGGTATTGATCAAAGTACGGCACTTTTCGACGGCGTCAATAGCGAAGGCTTGGCTGGCGACTTGCAGGTTTTGGTAGAGTGCAGCTGGGCGAGTGCGGATTCTTTGAAACAGCGTGGGCTGAAAGCTATTAAAGGCGAGGAGTTTGTGACCTTGGCCTTGACGACATGCAAAAATGTTGACGAAGTACGCGCTTTGGCGGGTGAGTATGGCCTGCTGGATGAACCTTATGAGTTTGGCGGCCAAGGGGTGAAAATCCCATTACATTACACATTTGTTGATCCATCAGGTAAGGGGATTGTTGTCGAACCAACCGATCACGGCGCCTTTAAGCTGTATGATAGCATCGGCGCCATGACGAATAGTCCTGAATACGGGTGGCATGAAACCAATTTGCGCAATTATGTCAGTCTGAATGACAATAACTATCCTAAGGGGTCCGAATTAGGCGACTACCATATTGAGCCGATTGAGTTAGGCACAGGCTACGGGATGTTCGGTTTGCCAGGCGATTACACATCACCATCGCGGTTTCTGCGGGCAATGTTTGTTTCGCGTAATCTTGATCCCTTCAATAGCAAAGACGGCATTCGCGTATTATACAATGCTTTCAAGACTGTCTTGATTCCGCAGGGGCTAGGTCGCGACCCACAACATCAGGTTTTAACGGATTACACGCAGTACTGGTCTGGCTATGATCTGACGAAAAAGACAATTTTCGTGCAAGATTCAGACACATTGACAATGACAACGAAAACACTTGATCCGACTATTACTGACGTCACTTATGAAGATTTGGCTAAAACTGAACAGTTCAATCAACTGTAG 上游引物：CGGGATCCGATGTGTTCTTCAATGACAATTAAATCGC 下游引物：CCCAAGCTTCTACAGTTGATTGAACTGTTCAGTTTTAGC |
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silicare(金幣+3):很熱心的說~ 2010-12-22 11:53:29
star1987(金幣+2):非常感謝！ 2010-12-24 16:34:58
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基因組最好要酶切~生工的酶的確效率很高，但有時候P出的那是啥��！不敢恭維~~ 我最近也是再做這個，恰好酶用的和你一樣，生工，TAKARA LA, 還有一個2Xmix的。 因為，我是基因組酶切后P的，所以都能P出來，我這的問題是2K以上的片段只能LA來P。 總之我的建議是： 1，確定你的基因組的純化做的OK，沒有酚什么殘留。 2， 如果你還用基因組P，那就稀釋下做模板。 3，強烈建議酶切乙醇純化后再P。5,6個識別堿基的酶都可以~ 4，確定生工P出來的東西是對的,可能就是假陽性，那個效率太高的東西不一定可靠。 |
19樓2010-12-22 10:50:39
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