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13808906306金蟲 (正式寫手)
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[求助]
PCR引物的量如何確定，求助高手指教 已有1人參與
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| 最近做PCR發(fā)現(xiàn)一個(gè)問題，一些資料上說PCR體系中引物的量要稍大于模板的量，可是在PCR過程中引物不斷被消耗，我計(jì)算了下十幾二十幾個(gè)循環(huán)后引物明顯不夠啊，比如我做的PCR 50ul 體系：引物1、2各為25 pmol ，模板量4 pmol ，我的是倍數(shù)擴(kuò)增，按我的做法不到四個(gè)循，引物環(huán)就消耗干凈了�？墒俏以趯�(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)，PCR在第二十五、六個(gè)循環(huán)才出條帶，這是為什么啊。求高人指點(diǎn) |
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13808906306
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坐等高人指點(diǎn) 2樓2012-02-23 15:40:46
3樓2012-02-23 16:36:33
13808906306
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4樓2012-02-23 16:50:44
5樓2012-02-23 16:59:49
13808906306
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6樓2012-02-23 17:31:47
7樓2012-02-23 17:40:36
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+3): 呵呵 2012-02-24 10:51:54
小丹木木(金幣+3): 呵呵 2012-02-24 10:51:54
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這個(gè)問題與算法無關(guān)。 樓主，你的算法可能沒錯(cuò)，但是，你忽略一個(gè)重要問題：你的DNA都是你的目的產(chǎn)物嗎？肯定有許多其他無關(guān)序列的。 因此，計(jì)算沒有絲毫意義。這也是平常做PCR的時(shí)候根本不會(huì)計(jì)算的原因。 即使能夠定量。隨著循環(huán)數(shù)的提高，引物的使用量非常驚人的。另外，只要確實(shí)有目的序列，那么使用標(biāo)準(zhǔn)算法沒什么問題的。 |
8樓2012-02-24 08:26:25
wangwei2008
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9樓2012-02-24 10:32:42
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10樓2012-02-24 15:34:52
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