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overlap PCR之問題
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| 各位,我最近在連基因A(700bp左右)和基因B(700bp左右),重疊的連個引物為48bp,連個基因各占24bp。當(dāng)做重疊PCR時,在1400bp處有條帶(在我用的marker-D 1000bp和2000bp間的條帶)當(dāng)然也有其他的雜帶。我將此1400bp的帶回收后,以此為模板,用頭尾引物擴增,每次都是1400bp處條帶很暗,而在700bp處條帶很亮。我用回收的1400bp做模板時,分別擴基因A和基因B卻又能擴出來很明顯的A和B,這不是證明了我回收的1400bp為連接上的基因嗎 ,可為什么用頭尾引物擴1400本身卻擴不出來呢? |
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