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[交流]
overlap PCR之問題
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| 各位，我最近在連基因A（700bp左右）和基因B（700bp左右），重疊的連個(gè)引物為48bp，連個(gè)基因各占24bp。當(dāng)做重疊PCR時(shí)，在1400bp處有條帶（在我用的marker-D 1000bp和2000bp間的條帶）當(dāng)然也有其他的雜帶。我將此1400bp的帶回收后，以此為模板，用頭尾引物擴(kuò)增，每次都是1400bp處條帶很暗，而在700bp處條帶很亮。我用回收的1400bp做模板時(shí)，分別擴(kuò)基因A和基因B卻又能擴(kuò)出來很明顯的A和B，這不是證明了我回收的1400bp為連接上的基因嗎 ，可為什么用頭尾引物擴(kuò)1400本身卻擴(kuò)不出來呢？ |
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7樓2012-02-28 09:50:31
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1 ATGGTCAGCT ACTGGGACAC CGGGGTCCTG CTGTGCGCGC TGCTCAGCTG TCTGCTTCTC ACAGGATCTA GTTCAGGTAG TGATACAGGT AGACCTTTCG TACCAGTCGA TGACCCTGTG GCCCCAGGAC GACACGCGCG ACGAGTCGAC AGACGAAGAG TGTCCTAGAT CAAGTCCATC ACTATGTCCA TCTGGAAAGC 101 TAGAGATGTA CAGTGAAATC CCCGAAATTA TACACATGAC TGAAGGAAGG GAGCTCGTCA TTCCCTGCCG GGTTACGTCA CCTAACATCA CTGTTACTTT ATCTCTACAT GTCACTTTAG GGGCTTTAAT ATGTGTACTG ACTTCCTTCC CTCGAGCAGT AAGGGACGGC CCAATGCAGT GGATTGTAGT GACAATGAAA 201 AAAAAAGTTT CCACTTGACA CTTTGATCCC TGATGGAAAA CGCATAATCT GGGACAGTAG AAAGGGCTTC ATCATATCAA ATGCAACGTA CAAAGAAATA TTTTTTCAAA GGTGAACTGT GAAACTAGGG ACTACCTTTT GCGTATTAGA CCCTGTCATC TTTCCCGAAG TAGTATAGTT TACGTTGCAT GTTTCTTTAT 301 GGGCTTCTGA CCTGTGAAGC AACAGTCAAT GGGCATTTGT ATAAGACAAA CTATCTCACA CATCGACAAA CCAATACAAT CATAGATGTG GTTCTGAGTC CCCGAAGACT GGACACTTCG TTGTCAGTTA CCCGTAAACA TATTCTGTTT GATAGAGTGT GTAGCTGTTT GGTTATGTTA GTATCTACAC CAAGACTCAG 401 CGTCTCATGG AATTGAACTA TCTGTTGGAG AAAAGCTTGT CTTAAATTGT ACAGCAAGAA CTGAACTAAA TGTGGGGATT GACTTCAACT GGGAATACCC GCAGAGTACC TTAACTTGAT AGACAACCTC TTTTCGAACA GAATTTAACA TGTCGTTCTT GACTTGATTT ACACCCCTAA CTGAAGTTGA CCCTTATGGG 501 TTCTTCGAAG CATCAGCATA AGAAACTTGT AAACCGAGAC CTAAAAACCC AGTCTGGGAG TGAGATGAAG AAATTTTTGA GCACCTTAAC TATAGATGGT AAGAAGCTTC GTAGTCGTAT TCTTTGAACA TTTGGCTCTG GATTTTTGGG TCAGACCCTC ACTCTACTTC TTTAAAAACT CGTGGAATTG ATATCTACCA 601 GTAACCCGGA GTGACCAAGG ATTGTACACC TGTGCAGCAT CCAGTGGGCT GATGACCAAG AAGAACAGCA CATTTGTCAG GGTCCATGAA AAA CATTGGGCCT CACTGGTTCC TAACATGTGG ACACGTCGTA GGTCACCCGA CTACTGGTTC TTCTTGTCGT GTAAACAGTC CCAGGTACTT TTT 基因A 1 GACAAAACTC ACACATGCCC ACCGTGCCCA GCACCTGAAC TCCTGGGGGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC CTCATGATCT CTGTTTTGAG TGTGTACGGG TGGCACGGGT CGTGGACTTG AGGACCCCCC TGGCAGTCAG AAGGAGAAGG GGGGTTTTGG GTTCCTGTGG GAGTACTAGA 101 CCCGGACCCC TGAGGTCACA TGCGTGGTGG TGGACGTGAG CCACGAAGAC CCTGAGGTCA AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG TGCATAATGC GGGCCTGGGG ACTCCAGTGT ACGCACCACC ACCTGCACTC GGTGCTTCTG GGACTCCAGT TCAAGTTGAC CATGCACCTG CCGCACCTCC ACGTATTACG 201 CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAGTACAA CAGCACGTAC CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC CAGGACTGGC TGAATGGCAA GGAGTACAAG GTTCTGTTTC GGCGCCCTCC TCGTCATGTT GTCGTGCATG GCACACCAGT CGCAGGAGTG GCAGGACGTG GTCCTGACCG ACTTACCGTT CCTCATGTTC 301 TGCAAGGTCT CCAACAAAGC CCTCCCAGCC CCCATCGAGA AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGGCAGCCCC GAGAACCACA GGTGTACACC CTGCCCCCAT ACGTTCCAGA GGTTGTTTCG GGAGGGTCGG GGGTAGCTCT TTTGGTAGAG GTTTCGGTTT CCCGTCGGGG CTCTTGGTGT CCACATGTGG GACGGGGGTA 401 CCCGGGATGA GCTGACCAAG AACCAGGTCA GCCTGACCTG CCTGGTCAAA GGCTTCTATC CCAGCGACAT CGCCGTGGAG TGGGAGAGCA ATGGGCAGCC GGGCCCTACT CGACTGGTTC TTGGTCCAGT CGGACTGGAC GGACCAGTTT CCGAAGATAG GGTCGCTGTA GCGGCACCTC ACCCTCTCGT TACCCGTCGG 501 GGAGAACAAC TACAAGACCA CGCCTCCCGT GCTGGACTCC GACGGCTCCT TCTTCCTCTA CAGCAAGCTC ACCGTGGACA AGAGCAGGTG GCAGCAGGGG CCTCTTGTTG ATGTTCTGGT GCGGAGGGCA CGACCTGAGG CTGCCGAGGA AGAAGGAGAT GTCGTTCGAG TGGCACCTGT TCTCGTCCAC CGTCGTCCCC 601 AACGTCTTCT CATGCTCCGT GATGCATGAG GCTCTGCACA ACCACTACAC GCAGAAGAGC CTCTCCCTGT CTCCGGGTAA ATGA TTGCAGAAGA GTACGAGGCA CTACGTACTC CGAGACGTGT TGGTGATGTG CGTCTTCTCG GAGAGGGACA GAGGCCCATT TACT 基因B P1：5'GCTCTAGAATGGTCAGCTACTGGGACAC3' P2：5'GGTGGGCATGTGTGAGTTTTGTCTTTTTCATGGACCCTGACAAATGTG3' P3：5'CACATTTGTCAGGGTCCATGAAAAAGACAAAACTCACACATGCCCACC3' p4:5'GAGAATTCTCATTTACCCGGAGACAGGG3' |
2樓2012-02-27 19:56:30
3樓2012-02-27 19:57:18
4樓2012-02-28 09:14:14
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