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xukun1176銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】我走高效液相色譜的基線為什么會(huì)這樣？（現(xiàn)在可以看到圖了） 已有8人參與
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我用HPLC來(lái)分離多肽，用的柱子是C18 第一張圖的流動(dòng)相是： A：H20（含0.1%TFA） B：乙腈（不含TFA） 第二和三張圖的流動(dòng)相是： A：H20（含0.1%TFA） B：乙腈（含0.1%TFA） 洗脫條件均為： A（%） B（%） 0min 95 5 10min 95 5 60min 0 100 70min 0 100 流速為1ml/min； 其中：第一張圖與第二、三張圖是分別在不同的地方走了，用的柱子也不同。 第三張圖走的是制備型的C18，但是柱子材料和第二張圖的完全一樣。 那請(qǐng)問(wèn)大家，為什么當(dāng)我的目標(biāo)峰出現(xiàn)后，基線總是會(huì)飄移呢？而且還是B中未加TFA的向下飄，加了TFA的向上漂，什么原因呢？那要怎么做才能抑制基線漂移呢？ 另外，為什么走制備型的C18，我的目標(biāo)峰會(huì)變成波浪狀的山包呢？ 謝謝！��！ （1）乙腈中未加TFA  （2）乙腈中加了TFA  （3）制備型C18，流動(dòng)相條件和柱子填料與（2）圖相同，乙腈中加了TFA [ Last edited by xukun1176 on 2010-9-11 at 14:54 ] |
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制備型每次都這樣？做了幾次？仔細(xì)看了幾遍圖，還是感覺(jué)像是樣品沒(méi)進(jìn)到柱子里，吸收值都太低了，因?yàn)樵诜治鲋�，樣品吸收值和水峰差不多，但是制備型里峰沒(méi)有一個(gè)有和水峰同樣的吸收值，要么就是你的樣品不純被拖成了N多個(gè)物質(zhì)（可能性不大）要么就是樣品沒(méi)進(jìn)到柱子或是還沒(méi)洗脫出來(lái)。。。而且制備型的基線漂移也還好，范圍只是20以?xún)?nèi)。。。 液相上只是大體看看峰型來(lái)判斷樣品純度。。如果是單峰而且對(duì)稱(chēng)性比較好的話，可以初步判定是純品了。。不過(guò)最好是進(jìn)一步通過(guò)核磁和質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。 基線漂移無(wú)解。。同求高手解答。。 |
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