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leecius鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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關(guān)于高效液相色譜法基線(xiàn)波動(dòng)和基線(xiàn)漂移等引發(fā)因素的一些小結(jié) 已有62人參與
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最近在論壇里發(fā)現(xiàn)很多蟲(chóng)友在HPLC試驗(yàn)中經(jīng)常受到基線(xiàn)波動(dòng)或基線(xiàn)漂移的困擾，下面就我本人在實(shí)驗(yàn)中積累的或從別處了解到的一些經(jīng)驗(yàn)總結(jié)如下，歡迎大家指正。 1.液相系統(tǒng)沒(méi)有平衡好，柱子里的流動(dòng)相一直在變化，在檢測(cè)器里面的吸收就會(huì)一直變化，導(dǎo)致基線(xiàn)波動(dòng)的發(fā)生；梯度時(shí)如果其實(shí)比例的流動(dòng)相平衡時(shí)間過(guò)短也會(huì)造成基線(xiàn)波動(dòng)； 2.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不穩(wěn)定（比如溫度忽高忽低，氣流不斷變化等），這對(duì)于沒(méi)有柱溫箱或只有單向溫度變化的HPLC儀器的影響尤其明顯；即使有比較好的柱溫箱時(shí)，也要注意別讓空調(diào)的出風(fēng)口一直對(duì)照儀器吹，那樣基線(xiàn)也可能會(huì)波動(dòng)；此外實(shí)驗(yàn)室有電磁干擾時(shí)，也有可能會(huì)導(dǎo)致此問(wèn)題的發(fā)生； 3.檢測(cè)器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此時(shí)需要清洗流通池； 4.檢測(cè)器燈能量不足時(shí)，吸收會(huì)變得不穩(wěn)定，這時(shí)基線(xiàn)一般也不穩(wěn)定，特別是在低波長(zhǎng)處尤為明顯； 5.當(dāng)使用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，有時(shí)流動(dòng)相會(huì)使用兩相或以上的等度，這時(shí)混合器的很小的混合比例的誤差都會(huì)被放大，很有可能會(huì)使基線(xiàn)發(fā)生波動(dòng)，這時(shí)將流動(dòng)相按比例混合到一個(gè)通道里時(shí)，一般都會(huì)使情況改善很多； 6.流動(dòng)相里的有機(jī)相的截止波長(zhǎng)最好要大于檢測(cè)波長(zhǎng)20nm以上，這一點(diǎn)切記，比如甲醇的截止波長(zhǎng)是210nm，乙腈是190nm。當(dāng)使用230nm以下的檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，如果條件允許，最好使用乙腈，可以避免基線(xiàn)波動(dòng)，其余類(lèi)推； 7.儀器出現(xiàn)問(wèn)題也會(huì)造成基線(xiàn)波動(dòng)，比如(1)流動(dòng)相過(guò)濾頭堵塞、入口主動(dòng)閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、比例閥出故障、系統(tǒng)流路漏液，比如管路裂開(kāi)、peek接頭沒(méi)完全連上色譜柱而導(dǎo)致的泄露等； 8.沒(méi)有脫氣機(jī)的儀器，當(dāng)流動(dòng)相未脫氣或脫氣未徹底時(shí)，基線(xiàn)也會(huì)波動(dòng)；有脫氣機(jī)的每次使用前都要檢查一下是否正常工作； 9.當(dāng)大家使用梯度作為組分洗脫方式的時(shí)候，有條件的最好使用超純水，磷酸鹽、三乙胺等固體液體加入試劑也最好使用HPLC級(jí)別的，因?yàn)樵谔荻戎须S著有機(jī)相（洗脫力較強(qiáng)）的不斷增加，流動(dòng)相系統(tǒng)里的雜質(zhì)會(huì)在基線(xiàn)上反映出來(lái)，導(dǎo)致出現(xiàn)鬼峰或基線(xiàn)波動(dòng)； 10.流動(dòng)相中的有機(jī)相和緩沖液的比例一定要注意調(diào)配好，緩沖液的比例不能過(guò)大，要不然會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽在柱子里析出的情況，這樣不但會(huì)造成基線(xiàn)波動(dòng)的發(fā)生，甚至?xí)斐缮V柱毀壞； 11.當(dāng)色譜柱被污染時(shí)，也會(huì)造成基線(xiàn)波動(dòng)，這里尤其要注意的是大家在做合成中控實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，最好不要用合成的原始反應(yīng)液直接進(jìn)樣，因?yàn)樵豪锩嬗泻芏喾菢O性或極性很小的化合物，一旦進(jìn)入到反相色譜柱里和非極性的C18發(fā)生相互作用，很可能就洗脫不下來(lái)使色譜柱變性或者慢慢的被洗脫下來(lái)，造成以后的分析出現(xiàn)不穩(wěn)定的鬼峰或者基線(xiàn)波動(dòng)； 12.一些比較老的液相儀對(duì)電壓要求很高，電壓有點(diǎn)起伏檢測(cè)器就會(huì)反映教明顯，比如老的惠普和島津等儀器，這時(shí)需要配一個(gè)穩(wěn)壓電源來(lái)解決此問(wèn)題；此外儀器和電腦之間連接的數(shù)據(jù)線(xiàn)出問(wèn)題或老化也可能會(huì)使基線(xiàn)波動(dòng)。 當(dāng)然上面說(shuō)了這么多的原因，個(gè)人認(rèn)為還不是很全面，有些沒(méi)考慮到得地方還請(qǐng)大家不吝補(bǔ)充，以致共同進(jìn)步，謝謝！ [ Last edited by leecius on 2011-6-14 at 19:51 ] |
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3樓2011-06-12 23:01:33
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