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[交流]
【求助】HPLC基線漂移問(wèn)題 已有9人參與
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我的HPLC的流動(dòng)相是 A：含TFA0.01%的水 B：含TFA0.01%的乙腈 用5%~95%的B梯度洗脫，測(cè)定波長(zhǎng)為220，柱子平衡了一個(gè)多小時(shí)，但是還是基線漂移，就連進(jìn)樣量為零的時(shí)候，都漂移，空白溶劑也漂移，樣品也漂移，但是可以看到樣品比空白溶劑多一個(gè)小小峰，這是怎么回事？我還能繼續(xù)做嗎？如何解決呢？ 謝謝大家的回復(fù)，我后來(lái)把檢測(cè)波長(zhǎng)換成270nm了，基線雖然還是有些漂移，但已經(jīng)好多了，樣品的峰也明顯了，我想應(yīng)該還是梯度洗脫與檢測(cè)波長(zhǎng)的原因，機(jī)器還是一年前買(mǎi)的，不會(huì)是機(jī)器故障，流動(dòng)相都是用的HPLC級(jí)別的，并過(guò)濾除氣，流動(dòng)相的影響不大。TFA我是必須加入到流動(dòng)相中，用于保護(hù)我的樣品，因?yàn)闃悠防锩嬗卸嚯摹?br /> 謝謝大家的熱心回復(fù) [ Last edited by 落雪含香 on 2011-4-6 at 11:23 ] |
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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
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由于TFA本身是有紫外吸收，往往在水和乙腈溶液中的紫外吸收也是不一樣的（在220nm時(shí)TFA-乙腈高于TFA-水，210nm正好相反），所以你會(huì)發(fā)現(xiàn)你的基線是會(huì)隨著乙腈的比例增加而一直往上飄直到95%保持不變，這個(gè)是正常現(xiàn)象。 不同廠家生產(chǎn)的HPLC級(jí)的TFA質(zhì)量不盡相同，就我個(gè)人經(jīng)歷發(fā)現(xiàn)只有少數(shù)幾家的（新開(kāi)瓶的）TFA配流動(dòng)相走基線不會(huì)有小雜峰，不同廠家生產(chǎn)的TFA形成的雜峰都不一樣的，這個(gè)實(shí)際就是TFA里面的有強(qiáng)紫外吸收的雜質(zhì)，大部分情況下對(duì)于我們?nèi)粘７治龆疾粫?huì)有太大影響，偶爾碰到做雜質(zhì)檢查時(shí)可能會(huì)干擾測(cè)定，這時(shí)要么換進(jìn)口的高質(zhì)量TFA（推薦 J.T.Baker的），要么改改梯度分開(kāi)它們。 |
10樓2011-04-02 20:20:13
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