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[交流]
【求助】HPLC基線漂移問題 已有9人參與
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我的HPLC的流動相是 A：含TFA0.01%的水 B：含TFA0.01%的乙腈 用5%~95%的B梯度洗脫，測定波長為220，柱子平衡了一個多小時，但是還是基線漂移，就連進樣量為零的時候，都漂移，空白溶劑也漂移，樣品也漂移，但是可以看到樣品比空白溶劑多一個小小峰，這是怎么回事？我還能繼續(xù)做嗎？如何解決呢？ 謝謝大家的回復(fù)，我后來把檢測波長換成270nm了，基線雖然還是有些漂移，但已經(jīng)好多了，樣品的峰也明顯了，我想應(yīng)該還是梯度洗脫與檢測波長的原因，機器還是一年前買的，不會是機器故障，流動相都是用的HPLC級別的，并過濾除氣，流動相的影響不大。TFA我是必須加入到流動相中，用于保護我的樣品，因為樣品里面有多肽。 謝謝大家的熱心回復(fù) [ Last edited by 落雪含香 on 2011-4-6 at 11:23 ] |
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由于TFA本身是有紫外吸收，往往在水和乙腈溶液中的紫外吸收也是不一樣的（在220nm時TFA-乙腈高于TFA-水，210nm正好相反），所以你會發(fā)現(xiàn)你的基線是會隨著乙腈的比例增加而一直往上飄直到95%保持不變，這個是正常現(xiàn)象。 不同廠家生產(chǎn)的HPLC級的TFA質(zhì)量不盡相同，就我個人經(jīng)歷發(fā)現(xiàn)只有少數(shù)幾家的（新開瓶的）TFA配流動相走基線不會有小雜峰，不同廠家生產(chǎn)的TFA形成的雜峰都不一樣的，這個實際就是TFA里面的有強紫外吸收的雜質(zhì)，大部分情況下對于我們?nèi)粘７治龆疾粫刑笥绊懀紶柵龅阶鲭s質(zhì)檢查時可能會干擾測定，這時要么換進口的高質(zhì)量TFA（推薦 J.T.Baker的），要么改改梯度分開它們。 |
10樓2011-04-02 20:20:13
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