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leecius鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
關(guān)于高效液相色譜法基線波動和基線漂移等引發(fā)因素的一些小結(jié) 已有62人參與
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最近在論壇里發(fā)現(xiàn)很多蟲友在HPLC試驗中經(jīng)常受到基線波動或基線漂移的困擾，下面就我本人在實驗中積累的或從別處了解到的一些經(jīng)驗總結(jié)如下，歡迎大家指正。 1.液相系統(tǒng)沒有平衡好，柱子里的流動相一直在變化，在檢測器里面的吸收就會一直變化，導致基線波動的發(fā)生；梯度時如果其實比例的流動相平衡時間過短也會造成基線波動； 2.實驗室環(huán)境不穩(wěn)定（比如溫度忽高忽低，氣流不斷變化等），這對于沒有柱溫箱或只有單向溫度變化的HPLC儀器的影響尤其明顯；即使有比較好的柱溫箱時，也要注意別讓空調(diào)的出風口一直對照儀器吹，那樣基線也可能會波動；此外實驗室有電磁干擾時，也有可能會導致此問題的發(fā)生； 3.檢測器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此時需要清洗流通池； 4.檢測器燈能量不足時，吸收會變得不穩(wěn)定，這時基線一般也不穩(wěn)定，特別是在低波長處尤為明顯； 5.當使用低波長檢測時，有時流動相會使用兩相或以上的等度，這時混合器的很小的混合比例的誤差都會被放大，很有可能會使基線發(fā)生波動，這時將流動相按比例混合到一個通道里時，一般都會使情況改善很多； 6.流動相里的有機相的截止波長最好要大于檢測波長20nm以上，這一點切記，比如甲醇的截止波長是210nm，乙腈是190nm。當使用230nm以下的檢測波長時，如果條件允許，最好使用乙腈，可以避免基線波動，其余類推； 7.儀器出現(xiàn)問題也會造成基線波動，比如(1)流動相過濾頭堵塞、入口主動閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、比例閥出故障、系統(tǒng)流路漏液，比如管路裂開、peek接頭沒完全連上色譜柱而導致的泄露等； 8.沒有脫氣機的儀器，當流動相未脫氣或脫氣未徹底時，基線也會波動；有脫氣機的每次使用前都要檢查一下是否正常工作； 9.當大家使用梯度作為組分洗脫方式的時候，有條件的最好使用超純水，磷酸鹽、三乙胺等固體液體加入試劑也最好使用HPLC級別的，因為在梯度中隨著有機相（洗脫力較強）的不斷增加，流動相系統(tǒng)里的雜質(zhì)會在基線上反映出來，導致出現(xiàn)鬼峰或基線波動； 10.流動相中的有機相和緩沖液的比例一定要注意調(diào)配好，緩沖液的比例不能過大，要不然會出現(xiàn)緩沖鹽在柱子里析出的情況，這樣不但會造成基線波動的發(fā)生，甚至會造成色譜柱毀壞； 11.當色譜柱被污染時，也會造成基線波動，這里尤其要注意的是大家在做合成中控實驗的時候，最好不要用合成的原始反應液直接進樣，因為原液里面有很多非極性或極性很小的化合物，一旦進入到反相色譜柱里和非極性的C18發(fā)生相互作用，很可能就洗脫不下來使色譜柱變性或者慢慢的被洗脫下來，造成以后的分析出現(xiàn)不穩(wěn)定的鬼峰或者基線波動； 12.一些比較老的液相儀對電壓要求很高，電壓有點起伏檢測器就會反映教明顯，比如老的惠普和島津等儀器，這時需要配一個穩(wěn)壓電源來解決此問題；此外儀器和電腦之間連接的數(shù)據(jù)線出問題或老化也可能會使基線波動。 當然上面說了這么多的原因，個人認為還不是很全面，有些沒考慮到得地方還請大家不吝補充，以致共同進步，謝謝！ [ Last edited by leecius on 2011-6-14 at 19:51 ] |
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