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biolinshen銀蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】請(qǐng)教：DNA濃度測(cè)定 已有4人參與
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手頭有酶切后切膠純化（OMEGA）樣品兩份， 用于qPCR定量。 所以要求對(duì)純化后樣品精確定量。100倍稀釋后，測(cè)定濃度。 手頭兩臺(tái)DNA濃度分光光度計(jì)，一臺(tái)Eppendorf 的，一臺(tái)島津的。 對(duì)兩份樣品測(cè)定得出的濃度差異很大（35， 0） vs (100, 45) 最主要問題還在于A 樣本跑膠條帶亮度遠(yuǎn)小于B樣品。另外A260 /A 280 遠(yuǎn)小于 1.8. 我的問題 1. 有什么辦法可以更好去除DNA樣品中 蛋白等雜質(zhì)呢？ 我提取的質(zhì)粒DNA, 酶切后進(jìn)行膠純化， 難道還不能保證DNA的純度？ 2. 紫外分光光度計(jì)，對(duì)DNA濃度的測(cè)定準(zhǔn)確度如何？ 問了不少人，似乎對(duì)其精度都表示懷疑。 對(duì)各位的建議，謝過先！ |
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2樓2010-09-11 20:34:56
girlfisher
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3樓2010-09-11 20:54:08
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4樓2010-09-11 23:11:12
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5樓2010-09-12 19:50:22
priorpost06
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比值小于1.8說明你的DNA樣品含有蛋白質(zhì)，含有蛋白質(zhì)的話，測(cè)算DNA肯定不準(zhǔn)，而且會(huì)影響到PCR，要保證大于或是等于1.8，不能差距太大。 提取DNA的時(shí)候，離心速度要大小適宜，才能去除蛋白質(zhì)或是最大限度減少蛋白質(zhì)。 一般細(xì)菌用 12000r/min. 1.5mL 的離心管。 用紫外測(cè)DNA久必須要用石英比色皿或是比石英更好的，對(duì)照和溶解DNA的溶液要超純。 |
6樓2010-09-12 20:00:51
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8樓2010-09-12 20:22:11
biolinshen
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9樓2010-09-15 11:24:29
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