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bettyshan木蟲 (正式寫手)
夢幻biobrick
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[交流]
【求助/交流】酶切后無任何條帶是什么原因？
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我質(zhì)粒跑膠，大小大概正確，然后做酶切驗(yàn)證。用一種酶切，可以產(chǎn)生兩個(gè)片段。 我用NdeI酶切，4.5小時(shí)。酶切完后，跑膠，無任何條帶。請大家?guī)臀曳治鲆幌率鞘裁丛�？MARKER條帶正常。 謝謝 |
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lansing617
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3樓2010-09-25 20:57:59
molecula
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lstt09nk(金幣+2):鼓勵(lì)交流~~ 2010-09-25 22:36:13
bettyshan(金幣+1):謝謝~~ 2010-10-08 14:53:42
lstt09nk(金幣+2):鼓勵(lì)交流~~ 2010-09-25 22:36:13
bettyshan(金幣+1):謝謝~~ 2010-10-08 14:53:42
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我想說兩句 首先 請你闡述清楚問題到底是什么 你說的 能夠切開成為兩條帶的酶是什么 怎么后面又成了Nde I 一點(diǎn)都看不懂什么意思 如果你說的是Nde I 能夠切成兩條帶 但是實(shí)際上你切不出 那么原因有很多 質(zhì)粒是否純化 Buffer加入量和是否使用BSA都是問題 而且 有的酶酶活未必高 所以 你看看是不是考慮一下這些問題 首先 你要保證質(zhì)粒的純化 |
2樓2010-09-25 20:00:42
qiangfeng
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lstt09nk(金幣+3):很全面~~呵呵~~ 2010-09-25 22:36:34
bettyshan(金幣+1):謝謝交流 2010-10-08 14:54:02
lstt09nk(金幣+3):很全面~~呵呵~~ 2010-09-25 22:36:34
bettyshan(金幣+1):謝謝交流 2010-10-08 14:54:02
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首先，我想說在我們實(shí)驗(yàn)室里，質(zhì)粒跑電泳從來不用點(diǎn)Marker,只看看有沒有條帶（一般是1-3條帶）即可，然后用提取的質(zhì)粒為模板做PCR鑒定目的基因。如果PCR鑒定正確可以再做酶切鑒定， 其次，關(guān)于酶切沒有條帶。不知到你是要做單酶切還是雙酶切。我猜你可能是要做單酶切實(shí)驗(yàn)。酶切沒有目的基因原因很多，比如你提取的質(zhì)粒上是否連有目的基因；提取的質(zhì)粒中是否有酶抑制劑；酶切試劑在使用時(shí)是否存在不當(dāng)；酶切時(shí)間是否恰當(dāng)（在本實(shí)驗(yàn)室，4攝氏度，1-2d;16攝氏度，20h左右；37攝氏度，3h（這個(gè)用的較少）左右）等。 最后提一個(gè)建議，你在陳述問題的時(shí)候盡量詳細(xì)，把問題說清楚，以便于讓人明白你做實(shí)驗(yàn)過程中遇到的問題，便于解答你的問題。 以上僅是個(gè)人觀點(diǎn)，僅作參考！�。。。。。。。�！ |
4樓2010-09-25 22:09:33
aofeng860308
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5樓2010-09-26 00:34:32
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