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zheng20089829木蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】酵母表達(dá)外源蛋白，His-tag降解怎么辦
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| 最近在畢赤酵母中表達(dá)一個(gè)40kd左右的蛋白，電泳發(fā)現(xiàn)有兩條帶，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，底下那條帶不斷變濃，上面的帶基本沒(méi)有變化，用鎳柱純化吸附的只是上面的帶，下面的帶基本全部穿透，但測(cè)活性都有，且穿透峰活性更高，請(qǐng)教各位是不是由于組氨酸尾降解造成的，有什么方法可以避免。 |
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王家大成
木蟲 (正式寫手)
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2樓2010-10-07 11:33:49
提供幾個(gè)防止降解的辦法
★ ★ ★ ★
zheng20089829(金幣+1):謝謝參與
lstt09nk(金幣+3):感謝參與~ 2010-10-07 13:17:55
zheng20089829(金幣+1):謝謝參與
lstt09nk(金幣+3):感謝參與~ 2010-10-07 13:17:55
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目的蛋白可能是降解了。防止的方法有以下幾個(gè)： 一、低溫表達(dá)，可控制誘導(dǎo)溫度在22度到25度，具體的可以摸索一下 二、找一個(gè)合適的ph，我們表達(dá)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)ph超過(guò)6很容易降解。 三、發(fā)酵過(guò)程中加入蛋白酶抑制劑 四、構(gòu)建菌株時(shí)破壞掉蛋白酶的基因。 如果實(shí)在沒(méi)辦法，就想辦法提高表達(dá)量，縮短誘導(dǎo)時(shí)間。 |
3樓2010-10-07 12:13:45
4樓2010-10-08 20:11:18
zheng20089829
木蟲 (小有名氣)
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