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【求助/交流】流式 細(xì)胞數(shù)量問題 已有2人參與
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今天第一次做流式，是拿到其它分院實(shí)驗(yàn)室做的 三管情況是這樣的： 第一管，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞（長期藥物處理的細(xì)胞），未加抗體（這是某個(gè)老師讓做的，防止細(xì)胞自發(fā)熒光） 第二管，對照組（未處理的細(xì)胞），加熒光標(biāo)記的抗體 第三管，實(shí)驗(yàn)組（長期藥物處理的細(xì)胞），加熒光標(biāo)記的抗體 目的是檢測第二管和第三管細(xì)胞兩者表面蛋白的表達(dá)差異。 問題是這樣：第三管細(xì)胞數(shù)量偏少，10分鐘時(shí)間還沒有統(tǒng)計(jì)到1000個(gè)細(xì)胞，人家就不讓做了。說是必須到1萬個(gè)細(xì)胞，我提出統(tǒng)計(jì)一下熒光值，拿第三組1000細(xì)胞和二組10000個(gè)細(xì)胞比較一下，如果三大于二，一樣可以反應(yīng)問題，可人家說沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，讓重新做。 其實(shí)我離心時(shí)就發(fā)現(xiàn)第三管細(xì)胞數(shù)量少于第二管，計(jì)數(shù)有誤差，但主要問題還是離心把細(xì)胞丟失的，因?yàn)榈谝还軟]有離心，細(xì)胞數(shù)量是沒有問題的。 明天再做我該注意什么呢？細(xì)胞數(shù)量再增加是對的吧，熒光抗體量也多加一點(diǎn)。 |
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dhd997(金幣+2):謝謝交流。 2010-10-11 12:10:03
蝸牛VS蝸牛(金幣+10): 2010-10-11 16:33:25
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一般不會(huì)因?yàn)殡x心丟失細(xì)胞的，600~800g離5min就足夠了，如果是那種國產(chǎn)的15ml離心機(jī)，什么飛鴿牌的，大概就是1000~1500rpm 5min 如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞太少，那就用60mm皿養(yǎng)著，一般都有5次方個(gè)細(xì)胞了 1000個(gè)細(xì)胞確實(shí)太少，人家不讓做是正確的 熒光抗體一般都是根據(jù)細(xì)胞數(shù)加的 |
2樓2010-10-11 11:47:19
3樓2010-10-11 16:33:13
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4樓2010-10-11 17:20:45
5樓2010-10-13 13:55:33
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dhd997(金幣+2):很熱心。 2010-10-13 16:21:45
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6樓2010-10-13 14:30:23
7樓2010-10-15 10:55:18
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