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bioinfuture鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】小鼠脾淋巴細(xì)胞懸液制備求助——用于做流式細(xì)胞
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小弟想要做小鼠脾淋巴細(xì)胞的CD3/4/8染色，現(xiàn)在在制備脾淋巴細(xì)胞遇到瓶頸 上流式機(jī)，遇到的問題是，F(xiàn)SC/SSC象限圖，找不到的淋巴細(xì)胞群，死細(xì)胞特別多，中性粒細(xì)胞的位置也不正確。 我制備脾淋巴細(xì)胞是這樣的： 取出小鼠脾 在雙層200目濾網(wǎng)上反復(fù)研磨，得到小鼠脾細(xì)胞懸液（10ml，1640配） 1300rpm，6min（個(gè)別情況下，有些細(xì)胞未離到管底，附著在側(cè)壁上，我用的是水平轉(zhuǎn)子） 棄去上清，用1ml PBS懸起（這時(shí)，會(huì)有一團(tuán)白色絮狀物，有的大，有的小，用1ml槍頭反復(fù)吹，吹不散，但是如果堵在槍口，可以帶出來，我通常是吸出來，棄掉） 然后加ACK裂解液（自己配的，NH4CL，150mM）4ml 室溫裂解5min 加1640至10ml，立刻離心 棄掉上清，用1ml 1640懸起（如果我上步的絮狀物沒去處干凈的話，懸起還有絮狀物，如果去除干凈就沒有了），補(bǔ)液體至10ml 離心 ....... 不知道，為什么每次上機(jī)，淋巴細(xì)胞群總是找的不是十分理想，要么找到淋巴細(xì)胞群，但是位置不是十分正確，和中性粒細(xì)胞群相差很遠(yuǎn)。要么干脆找不到淋巴細(xì)胞群。不知是研磨得方法不對(duì)？還是ACK紅細(xì)胞裂解液使用不對(duì)？ 試驗(yàn)在即，小弟萬分著急，望大蝦幫助我解決之。 謝謝 |
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