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feiye2214木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】十萬火急，IPTG誘導(dǎo)是怎么回事，給我說個大概 已有5人參與
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| RT：IPTG誘導(dǎo)大致原理 |
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2樓2010-10-22 14:29:00
lxj341401
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3樓2010-10-22 14:56:45
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5樓2010-10-22 19:33:54
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amisking(金幣+3):good！ 2010-10-22 20:25:40
amisking(金幣+3):good！ 2010-10-22 20:25:40
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遇到高手了，我就把我做的跟你說說，幫我看看哈！  我將EGFP基因（來自pEGFP-1，酶切位點是Not I/EcoR I）插到上圖的pGEX-4T-1的Not I/EcoR I中！這樣重組的質(zhì)粒應(yīng)該能表達EGFP 吧，要在DE3大腸桿菌中表達？不是很清楚，我是直接轉(zhuǎn)到DH5a感受態(tài)中的，要換菌還是怎么誘導(dǎo)？才能讓EGFP在大腸桿菌中表達哈！ 這是我的pEGFP-1圖   [ Last edited by feiye2214 on 2010-10-22 at 20:15 ] |
6樓2010-10-22 20:13:51
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7樓2010-10-23 10:07:43
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9樓2010-10-24 09:38:28
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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| 表達載體上的Tac啟動子是雜合trp啟動子和lac啟動子得來,轉(zhuǎn)錄起始位點與RBS之間有操縱基因lacO,阻遏蛋白lacI在沒有誘導(dǎo)劑時會結(jié)合到lacO,有誘導(dǎo)劑時,阻遏蛋白就結(jié)合不了,啟動子就可以轉(zhuǎn)錄lacO后面的基因.通常質(zhì)�？截悢�(shù)高,lacO的數(shù)量多,宿主本身的lacI不足以阻遏.一般為了降低本底表達,提高質(zhì)粒穩(wěn)定性,會在增加表達載體上插入阻遏蛋白lacI基因。由于質(zhì)粒帶有l(wèi)acI，lacO，可以在各種大腸桿菌進行表達。 |
10樓2013-05-28 09:16:08
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