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lwcy1000鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出現(xiàn)兩條帶，并離的很近，什么原因啊？
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| BL21菌株 IPTG誘導(dǎo)后，經(jīng)高壓破碎，鎳柱純化后，出現(xiàn)兩條帶，并離的很近，什么原因�。� |
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quiller2000
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
scelab(金幣+7, MicEPI+1): 高手，這些原因都是需要實(shí)踐才能總結(jié)的出來(lái)的啊。 2011-12-31 00:56:01
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
scelab(金幣+7, MicEPI+1): 高手，這些原因都是需要實(shí)踐才能總結(jié)的出來(lái)的啊。 2011-12-31 00:56:01
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首先，你要確定是誘導(dǎo)出來(lái)的帶 在這個(gè)前提下，你可以先用你的目標(biāo)蛋白的抗體檢測(cè)一下，如果兩條帶都有信號(hào)，則有可能是降解（如果你的目標(biāo)條帶是滯后帶）或者是蛋白質(zhì)復(fù)合物（如果你的目標(biāo)條帶是前面的那個(gè)帶） 如果是降解，那么有可能你的目標(biāo)條帶有特異性的降解，如果你做了幾次都是這樣的話。那么恭喜你，你應(yīng)該馬上去挖膠測(cè)序，看看是不是有特定的剪切位點(diǎn)，或者，保守一些，用其它的表達(dá)系統(tǒng)試試 如果是第二種，同樣恭喜你，雖然是走SDS-PAGE，有的時(shí)候也是有這樣的運(yùn)氣的，比如分子內(nèi)的共價(jià)鍵結(jié)合；建議加大DTT的濃度試試 還有一種情況，你的蛋白引起了大腸桿菌或者說(shuō)你的表達(dá)宿主中的某個(gè)蛋白質(zhì)的超量表達(dá)，這也將是一個(gè)很有意思的問(wèn)題。 祝你好運(yùn)！ |
5樓2011-12-30 23:11:53
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2樓2011-12-18 19:11:22
dasheng1980
鐵桿木蟲(chóng) (知名作家)
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3樓2011-12-30 13:15:43
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