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IPTG誘導表達出現(xiàn)兩條帶，并離的很近，什么原因��？
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| BL21菌株 IPTG誘導后，經(jīng)高壓破碎，鎳柱純化后，出現(xiàn)兩條帶，并離的很近，什么原因��？ |
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4樓2011-12-30 14:58:24
dasheng1980
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3樓2011-12-30 13:15:43
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
scelab(金幣+7, MicEPI+1): 高手，這些原因都是需要實踐才能總結(jié)的出來的啊。 2011-12-31 00:56:01
感謝參與，應助指數(shù) +1
scelab(金幣+7, MicEPI+1): 高手，這些原因都是需要實踐才能總結(jié)的出來的啊。 2011-12-31 00:56:01
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首先，你要確定是誘導出來的帶 在這個前提下，你可以先用你的目標蛋白的抗體檢測一下，如果兩條帶都有信號，則有可能是降解（如果你的目標條帶是滯后帶）或者是蛋白質(zhì)復合物（如果你的目標條帶是前面的那個帶） 如果是降解，那么有可能你的目標條帶有特異性的降解，如果你做了幾次都是這樣的話。那么恭喜你，你應該馬上去挖膠測序，看看是不是有特定的剪切位點，或者，保守一些，用其它的表達系統(tǒng)試試 如果是第二種，同樣恭喜你，雖然是走SDS-PAGE，有的時候也是有這樣的運氣的，比如分子內(nèi)的共價鍵結(jié)合；建議加大DTT的濃度試試 還有一種情況，你的蛋白引起了大腸桿菌或者說你的表達宿主中的某個蛋白質(zhì)的超量表達，這也將是一個很有意思的問題。 祝你好運！ |
5樓2011-12-30 23:11:53
liubowhict
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