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beisimai895木蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于酶切問題 已有10人參與
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| 最近做了一個克隆，轉(zhuǎn)化之后做菌落PCR，驗證均連接成功，但是酶切的時候卻觀察不到目的條帶，做的這個克隆，載體大小為7KB，目的片段為480bp，酶切后，可以看見載體，但看不到目的條帶，現(xiàn)在有個問題想請教，是否是因為目的片段和載體相差太大，所用即使觀察到了載體（條帶也不是很亮），但是去看不到目的片段，或者還有別的原因？ |
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lxj341401
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2樓2010-10-26 13:15:00
susizheng
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3樓2010-10-26 20:26:06
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該是相差太懸殊了，如果載體也不是很亮，那么小的片段肯定是看不到的。 本文來自: 小木蟲論壇 " target="_blank">http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=2529197&fpage=1 ![](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/biggrin.gif\") |
4樓2010-10-26 20:30:13
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6樓2010-10-26 22:06:34
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7樓2010-10-26 23:40:30
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8樓2010-10-27 01:12:57
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silicare(金幣+2):鼓勵交流 2010-10-27 12:04:29
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silicare(金幣+2):鼓勵交流 2010-10-27 12:04:29
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首先就是上面的好多蟲蟲說過的片段差距太大，小片段的量已經(jīng)不足以看到了。 如果你做的是雙切那也有可能是一個酶切開了另外一個酶沒有切開，可以兩個酶分開來切一下試試看，如果有一個酶切不開就說明是這個問題了。 另外你前面做連接之前是否也進行過酶切，如果進行過那也可能是那一步酶切的時候所用的酶有核酸外切酶活性，把片段的末端切掉了幾個堿基，連接還是能正常進行但是連上之后的酶切位點就產(chǎn)生了變化，所以再進行酶切的時候位點不對了也就切不開了。 |
10樓2010-10-27 09:43:26
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