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gn2003_0金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】求助高手-棉花中RNA提取質(zhì)量驗證及反轉(zhuǎn)后cDNA質(zhì)量驗證問題 已有3人參與
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我用試劑盒提取棉花RNA，由于新手有相關(guān)問題請教，首先是棉花RNA電泳后是不是應(yīng)該有兩條帶，而我提取的RNA電泳圖片如下（去離子甲酰胺變性，1.2%凝膠電泳） 定量后OD260/280=1.9-2.2之間，當(dāng)時就做了反轉(zhuǎn)。隨后放置一周左右進(jìn)行電泳驗證，結(jié)果如下，泳道左側(cè)八個為cDNA質(zhì)量驗證結(jié)果，有彌散的條帶但是很弱，是不是CDNA質(zhì)量不行，或者就是當(dāng)初RNA提取的質(zhì)量就不好不適合反轉(zhuǎn)呢。 另外下面片子的右側(cè)四個亮的泳道是我放置一周后的RNA質(zhì)量，結(jié)果直接分不開帶（我是沒有變性直接跑的電泳）  [ Last edited by gn2003_0 on 2010-10-27 at 21:15 ] |
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gn2003_0
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silicare(金幣+3):很詳細(xì) 2010-10-28 11:55:06
gn2003_0(金幣+6):你回答的很詳細(xì) 多謝了 2010-10-30 10:18:46
silicare(金幣+3):很詳細(xì) 2010-10-28 11:55:06
gn2003_0(金幣+6):你回答的很詳細(xì) 多謝了 2010-10-30 10:18:46
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一，RNA電泳時會出現(xiàn)3條帶的，不用跑變性膠也行的，我們的RNA就跑正常瓊脂糖膠也結(jié)果很好的。 二，你的OD值表明你的RNA質(zhì)量還是可以的，應(yīng)該不會出現(xiàn)RNA的問題。 三，反轉(zhuǎn)后的電泳DNA彌散而且很不清楚，可能的原因有：從點樣到開始跑膠的時間過長DNA彌散了；反轉(zhuǎn)的時候出錯了；第二種可能性大。 四，RNA就算在-80度都會降解的，所以如果是在-20度放置一周可能RNA會降解的。 五，個人覺得如果你的RNA是一直在-80度保存的話就再好好做一次反轉(zhuǎn)。 |
8樓2010-10-28 10:37:33
9樓2010-10-28 12:11:04
gn2003_0
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10樓2010-10-30 10:21:08
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