 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2329 | 回復(fù): 8 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
wenmingfu木蟲 (著名寫手)
|
[交流]
【求助/交流】求動(dòng)物組織DNA提取方法 已有3人參與
|
|||
| 求動(dòng)物組織DNA提取方法 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 DNA檢測(cè) |
» 猜你喜歡
江蘇省優(yōu)青門檻
已經(jīng)有20人回復(fù)
-
心好累。今年我們部門提交了18個(gè)項(xiàng)目。中了11了，可惜我的又掛了
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
植物學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有295人回復(fù)
-
面上項(xiàng)目計(jì)劃書
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
面上項(xiàng)目計(jì)劃書附件
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
面上項(xiàng)目計(jì)劃書系統(tǒng)狀態(tài)
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
NSFC-UNEP（與聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署）合作項(xiàng)目
已經(jīng)有33人回復(fù)
-
和伊朗人合作
已經(jīng)有32人回復(fù)
-
江蘇省自然基金
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
生命科學(xué)新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已經(jīng)有8人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 動(dòng)植物版塊版規(guī)意見征求，大家積極參與討論，有意義建議重獎(jiǎng)！！
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】求高人指點(diǎn) 關(guān)于國外實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料標(biāo)準(zhǔn)
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 【求助/交流】動(dòng)物性產(chǎn)品形成的生化過程及其調(diào)控機(jī)理？
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 【求助/交流】熒光素（四環(huán)素 二甲酚橙 鈣黃綠素）的配比濃度和方法
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 【求助/交流】求動(dòng)物百科書一本
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 【求助/交流】求測(cè)定腎組織醛糖還原酶活性方法
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】甘油保存菌苗解凍注意事項(xiàng)
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】求高手分析RNA電泳結(jié)果
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】求高手分析RNA電泳結(jié)果
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】求論文一篇
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于材料植皮若干時(shí)間組織材料切片圖的分析
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】快進(jìn)來看�。★@微注射-轉(zhuǎn)基因
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 【求助/交流】求“動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)指南第五版”弗雷謝尼著的電子版
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助】底棲動(dòng)物鑒定時(shí)不認(rèn)識(shí)物種還求高手
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】求細(xì)胞培養(yǎng)中試實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)要求
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】求區(qū)別植物與動(dòng)物的基因序列或基因名
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)酵母
已經(jīng)有16人回復(fù)
wenwen4599
金蟲 (正式寫手)
- APEPI: 10
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 652.6
- 散金: 20
- 紅花: 4
- 帖子: 488
- 在線: 75.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1648200
- 注冊(cè): 2012-02-27
- 性別: MM
- 專業(yè): 動(dòng)物系統(tǒng)及分類學(xué)
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
xy656691: 金幣+2, 應(yīng)助指數(shù)+1 2013-01-11 21:45:24
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
xy656691: 金幣+2, 應(yīng)助指數(shù)+1 2013-01-11 21:45:24
| 看你做的是什么類群的動(dòng)物了。如果是保護(hù)動(dòng)物的話只能取毛發(fā)、糞便、血液這些提取DNA，最好去買個(gè)試劑盒提吧，比如我們這里常用的Axygen的。如果是普通的動(dòng)物，個(gè)體又比較大的話可以直接解剖取組織。我們這里用的是比較原始的酚氯仿方法，直接取樣用剪刀剪碎。一般都用自己配制的裂解緩沖液，具體的配方你可以參考《分子克隆指南》。取一個(gè)火柴頭大小的新鮮樣品（如果是酒精保存的樣品，需要先用雙蒸水脫醇）置于裂解緩沖液中，用干凈的剪刀剪碎，一直剪到看不到明顯的大顆粒，有條件的話也可以用電動(dòng)勻漿器粉碎。組織懸浮液中加入蛋白酶K，于55℃水浴中消化6-8小時(shí)。如果不好消化的時(shí)候也可以消化過夜。但最好不要超過16個(gè)小時(shí)。之后的操作就是經(jīng)典的酚氯仿抽提方法了。第一次加入與消化液等體積的飽和酚，上下顛倒混勻15min，8000rpm離心10min，取上清；第二次向上清中加入1/2體積飽和酚，1/2體積氯仿-異戊醇（貌似比例是13:2，試劑公司有配好的賣），上下顛倒混勻15min，8000rpm離心10min，取上清；要注意不要將上清液和下面的有機(jī)溶劑中間分界線上的白色蛋白質(zhì)吸上來。如果覺得吸上來了可以重復(fù)第二步；第三次向上清中加入等體積氯仿-異戊醇，上下顛倒混勻15min，8000rpm離心10min，取上清。然后向上清液中加入2倍體積無水乙醇或等體積異丙醇沉淀DNA，這步要加NaAc的，具體的量可以看《分子克隆指南》。上下顛倒混勻后加無水乙醇的可以放4℃1小時(shí)或是-20℃ ≥8h充分沉淀。異丙醇可以在室溫靜置1h。之后12000rpm離心，棄上清，用75%乙醇洗滌沉淀后，置于室溫風(fēng)干。最后用雙蒸水溶解就可以了。 |
8樓2013-01-11 11:43:35
★
dhd997(金幣+1):熱心鼓勵(lì)。 2010-11-02 17:12:36
wenmingfu(金幣+2): 2010-11-03 15:20:51
wenmingfu(金幣+5): 2011-03-24 21:58:20
dhd997(金幣+1):熱心鼓勵(lì)。 2010-11-02 17:12:36
wenmingfu(金幣+2): 2010-11-03 15:20:51
wenmingfu(金幣+5): 2011-03-24 21:58:20
|
Lysis Buffer 1. 100 mM Tris---HCL PH8.3 (50 ml 1M Tris) 2. 500 mM KCL (18.73 g ) 3. 0.1% Gelatin (0.5 g ) 4. 0.45% NP40 (2.25 ml ) 5. 0.45% Tween---20 (2.25 ml ) + H2O =500ml 用的時(shí)候加入PK 水浴55度過夜。第二天100度滅活，冷卻至4度后可以直接進(jìn)行PCR鑒定 |
2樓2010-11-02 15:20:56
fzfangtao
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 3740.5
- 散金: 17
- 紅花: 2
- 帖子: 599
- 在線: 327.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1109163
- 注冊(cè): 2010-09-27
- 專業(yè): 植物進(jìn)化生物學(xué)
★ ★ ★
dhd997(金幣+3):謝謝交流。 2010-11-02 19:13:50
wenmingfu(金幣+3): 2010-11-03 15:21:24
wenmingfu(金幣+3): 2011-03-24 21:57:55
dhd997(金幣+3):謝謝交流。 2010-11-02 19:13:50
wenmingfu(金幣+3): 2010-11-03 15:21:24
wenmingfu(金幣+3): 2011-03-24 21:57:55
|
1. 組織樣品和培養(yǎng)細(xì)胞的裂解 （1）組織樣品 ① 將lg新鮮切取的組織在液氮中速凍，并用液氮預(yù)冷的研缽研磨。 ② 液氮揮發(fā)，將組織粉末一點(diǎn)一點(diǎn)地加入盛有10倍體積裂解液的燒杯中，使其分散于裂解液表面，后振搖燒杯使粉末浸沒。 ③ 將懸液轉(zhuǎn)移至50ml三角瓶中，并于37℃溫育1h，立即進(jìn)行步驟1.2.。 （2）培養(yǎng)細(xì)胞 ①單層培養(yǎng)細(xì)胞 i.從孵箱中取出長滿單層細(xì)胞的培養(yǎng)皿，迅速吸去培養(yǎng)液，用冰冷的TBS洗2次，加入1ml新鮮的冰冷的TBS。 ii. 用橡膠刮棒將細(xì)胞刮入1ml TBS中，用吸管將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到冰上的離心管中。用0.5 ml冰冷的TBS沖洗培養(yǎng)皿，后并入離心管的細(xì)胞懸液。 iii.于4℃3000r/min離心10min以收集細(xì)胞。 iv. 將細(xì)胞重懸于5倍~10倍體積的冰冷TBS中并再度離心。 v. 用1 ml TE（PH8.0）重新懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至50 ml三角瓶中。 vi. 每毫升細(xì)胞懸液加10 ml裂解緩沖液，于37℃溫育1h，立即進(jìn)行步驟1.2.。 ②懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞 i.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管，于4℃3000r/min離心10min以收集細(xì)胞，吸去上清。 ii.用1倍體積冰冷的TBS重懸細(xì)胞并再度離心，吸去上清，小心地再次重懸細(xì)胞于冰冷的TBS中，離心收集細(xì)胞。 iii.去上清，用1ml TE（PH8.0）重新懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至50 ml三角瓶中。 iv.每毫升細(xì)胞懸液加10 ml裂解緩沖液，于37℃溫育1h，立即進(jìn)行步驟1.2.。 2.將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，裂解液不能超過1/3體積。 3.加入蛋白酶K（20mg/ml）至終濃度100µg/ml。用一滅菌玻璃棒溫和地將酶混入細(xì)胞裂解液中。 4.將細(xì)胞裂解液置于50℃水浴中保溫3 h，并不時(shí)振搖。 5.將溶液冷卻至室溫，加入等體積的平衡酚，將離心管置于渦旋器上,使離心管緩慢顛轉(zhuǎn)10min 以溫和地混合兩相。 6.室溫下，6500r/min離心15 min以分離兩相。 7.用寬口移液管將黏滯的水相轉(zhuǎn)移至另一離心管。 8.苯酚抽提兩次，收集水相。 9.加入0.2倍體積10mol/L醋酸銨及2倍體積無水乙醇，旋轉(zhuǎn)離心管直至溶液徹底混勻?yàn)橹埂? 10.DNA隨即形成沉淀，在室溫下6500r/min離心5 min，收集沉淀。 11.用70%乙醇洗滌DNA沉淀2次，按步驟1.10.離心收集DNA。 12.盡可能吸去殘余乙醇,于室溫下，將DNA沉淀置于敞開的管內(nèi)，直至乙醇揮發(fā)殆盡。 13.按每0.1m1細(xì)胞(步驟1.1)加入1ml TE溶解DNA，將DNA溶液儲(chǔ)存于4℃。 14.用紫外分光光度法或二苯胺顯色法檢測(cè)DNA含量。詳見本實(shí)驗(yàn)第二部分。 |
3樓2010-11-02 17:20:28
zhanglin_84
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.001
- 金幣: 1347.8
- 散金: 304
- 紅花: 4
- 帖子: 688
- 在線: 151.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1000126
- 注冊(cè): 2010-04-18
- 專業(yè): 生理生態(tài)學(xué)
4樓2010-11-02 21:55:47
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +5 | AZMK 2026-03-29 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 085404求調(diào)劑，總分309，本科經(jīng)歷較為豐富 +6 | 來財(cái)aa 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑，一志愿西北工業(yè)大學(xué)，材料工程（085601） +4 | 小小機(jī)靈蟲 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥調(diào)劑 +5 | Feisty。 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +7 | 璞玉~~ 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 320分，材料與化工專業(yè)，求調(diào)劑 +9 | 一定上岸aaa 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +7 | 嗯滴的基本都 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料292調(diào)劑 +12 | 橘頌思美人 2026-03-23 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 安徽大學(xué)專碩生物與醫(yī)藥專業(yè)(086000)324分，英語已過四六級(jí)，六級(jí)521，求調(diào)劑 +4 | 美味可樂雞翅 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +5 | Pigcasso 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 林之夕 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +8 | 匹克i 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研]
 304材料求調(diào)劑
+4
|
鐘llll 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料專碩 335 分求調(diào)劑 +4 | 拒絕冷暴力 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑 +4 | LHHL66 2026-03-23 | 4/200 |
|