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jackiechubut

木蟲 (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】干擾載體

構(gòu)建的干擾表達(dá)載體轉(zhuǎn)入模式生物中（擬南芥，煙草），northern檢測(cè)是否可以檢測(cè)到dsRNA的存在？

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1樓 2010-11-08 22:22:00

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jackiechubut

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Originally posted by randomqd at 2010-11-09 08:28:10:
干擾RNA表達(dá)載體的表達(dá)沉默dsRNA，是要檢測(cè)被沉默的dsRNA嗎？
如果你設(shè)計(jì)的siRNA干擾序列合理的話，一般干擾的效率都是很高的。
當(dāng)然也不會(huì)是100%，
看你想要的結(jié)果，應(yīng)該是會(huì)留下一點(diǎn)痕跡的。
關(guān)鍵還是看你做 ...

我做的是在植物體內(nèi)表達(dá)外源基因的干擾載體，所以想知道能否在轉(zhuǎn)基因植物中檢測(cè)到dsRNA，還是只能檢測(cè)到小RNA的存在？

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3樓2010-11-09 10:10:40

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randomqd

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干擾表達(dá)載體？

★ ★
dhd997(金幣+2):謝謝交流。 2010-11-09 08:34:11
jackiechubut(金幣+1): 2010-11-09 10:10:51

干擾RNA表達(dá)載體的表達(dá)沉默dsRNA，是要檢測(cè)被沉默的dsRNA嗎？
如果你設(shè)計(jì)的siRNA干擾序列合理的話，一般干擾的效率都是很高的。
當(dāng)然也不會(huì)是100%，
看你想要的結(jié)果，應(yīng)該是會(huì)留下一點(diǎn)痕跡的。
關(guān)鍵還是看你做雜交的背景了。

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2樓2010-11-09 08:28:10

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應(yīng)該是檢測(cè)到siRNA

★ ★ ★
dhd997(金幣+3):good 2010-11-09 16:52:23
jackiechubut(金幣+1): 2010-11-09 17:04:06

沒(méi)看懂你說(shuō)的是轉(zhuǎn)基因植物，還是干擾后的轉(zhuǎn)基因植物。
建議看一下植物的沉默機(jī)制。
找?guī)灼嘘P(guān)基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章：比如在GFP轉(zhuǎn)基因植物中瞬時(shí)表達(dá)外源基因轉(zhuǎn)進(jìn)去外源GFP，產(chǎn)生的siRNA會(huì)抑制掉外源的GFP表達(dá)，也抑制內(nèi)源的表達(dá)。
但是就算是抑制掉GFP也會(huì)有淺淺的一條帶吧。
本來(lái)嘛雜交就是定性的。
抑制GFP的表達(dá)，但是體內(nèi)GFP的siRNA應(yīng)該是會(huì)很濃。。。
至于說(shuō)dsRNA。。。只能有些基因里有報(bào)道。。。
因?yàn)樾∫稽c(diǎn)的dsRNA 50-200bp的也有可能沉默基因的
我說(shuō)得亂亂的。。。
沒(méi)看懂你說(shuō)的穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因植物還是瞬時(shí)沉默的植物
祝好運(yùn)

[ Last edited by randomqd on 2010-11-9 at 16:30 ]

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4樓2010-11-09 16:28:21

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引用回帖:

Originally posted by randomqd at 2010-11-09 16:28:21:
沒(méi)看懂你說(shuō)的是轉(zhuǎn)基因植物，還是干擾后的轉(zhuǎn)基因植物。
建議看一下植物的沉默機(jī)制。
找?guī)灼嘘P(guān)基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章：比如在GFP轉(zhuǎn)基因植物中瞬時(shí)表達(dá)外源基因轉(zhuǎn)進(jìn)去外源GFP，產(chǎn)生 ...

我做的是利用這個(gè)機(jī)理來(lái)抗蟲，所以設(shè)計(jì)了干擾載體，干擾片段是昆蟲體內(nèi)的。轉(zhuǎn)入煙草和擬南芥中進(jìn)行抗蟲實(shí)驗(yàn)，想知道這樣獲得的轉(zhuǎn)基因煙草體內(nèi)是否可以檢測(cè)到dsRNA的存在

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5樓2010-11-09 17:17:10

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